重组DNA导入受体细胞.pptVIP

λ噬菌体DNA体外包装的主要过程 ①制备包装物。 须培养两种溶原菌 诱导溶菌生长 收集和贮存包装物。 ②体外包装。 制备λ噬菌体DNA混合液。 第一次包装。包装物刚融化时，细胞发生破裂，释放出包装物可立即用于包装。 第二次包装。进行第二次包装，可提高包装效率2－5倍，加入蛋白酶可降低包装反应液的黏度，便于包装反应的进行。 去除细胞屑。第二次包装后，在反应液中加入SM溶液 （噬菌体稀释缓冲液：100 mmol/L NaCl, 10 mmol/L MgSO4, 50 mmol/L Tris-HCL pH7.5)0.2%明胶和氯仿，混匀后离心去除碎屑。上清液中含活的噬菌体颗粒。 第六十二页，共九十二页。 第六十三页，共九十二页。 经过体外包装的噬菌体颗粒可以感染适当的受体菌细胞，并将重组λ噬菌体DNA分子高效导入细胞中。 在良好的体外包装反应条件下，每μg野生型的λ噬菌体DNA可形成108～109的pfu。对于重组的λ噬菌体DNA，包装后的成斑率要比野生型的有所下降，但仍可达到106～107pfu，完全可以满足构建真核基因组基因文库的要求。 第六十四页，共九十二页。 6、转化率的计算及其影响因素 转化率：指DNA分子转化受体菌获得转化子的效率。转化率是衡量转化效率的重要指标，有两种表示方式： 一是在待转化 DNA分子数大于受体细胞数的条件下，转化细胞与细胞总数之比。 二是在受