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产油真菌的诱变育种 邵征超 (浙江海洋学院数理海科系，浙江舟山316000) 摘要介绍了产油真菌的产油机理，设计了产油真菌的诱变育种方法。 关键词产油真菌诱变育种微生物油脂MUTATIONBREEDINGOFFUNGIPRODUCINGOIL SHAOzhengchao (ZhejiangOceanUniversity,ZhejiangZhoushan316000) ABSTRACTthispaperaimstointroducemechanismofproducingoilsfrommicroorganism,establishasimpleandpracticalmethodforscreeningfungiproducingoil. KEYWORDSfungiproducingoil;mutationbreeding;microbialoils1前言 随着石油资源的日益紧缺、石油价格的不断上涨、油品供需矛盾的日渐显现及环境污染问题的更加突出，多渠道开发可再生油脂资源成为必然。柴油是重要的油品.生物柴油具有能量密度高、含硫量低、燃烧充分、润滑性好等优良性能，还具有可再生、易生物降解、储运安全、抗爆性能好等特点，可作为优质的石化柴油代用品［1］。目前，国外用于生产生物柴油的原料主要是植物油，但原料成本占到总成本的70%?85%［2］,经济可行性差。产油微生物具有资源丰富、油脂含量高、碳源利用谱广等特点，开发潜力大，所以微生物油脂具有良好的发展前景，可能在未来生物柴油产业中发挥重要的作用。 在适宜条件下.某些微生物产生并储存的油脂占其生物总量的20%以上，具有这样表型的菌株称为产油微生物［3］。已知细菌、酵母、霉菌、藻类中都有能产生油脂的菌株.但以酵母菌和霉菌为主。微生物油脂(fMicrobialoils)又称为单细胞油脂(Singlecelloil，SCO1)，是由微生物在一定的条件下，利用碳水化合物、碳氢化合物和普通油脂作为碳源，在菌体内产生的大量油脂［4］。 2微生物残油脂机理 微生物产油脂的过程，本质上与动植物产生油脂的过程相似，都是从乙酰CoA羧化酶的羧化催化反应开始，经过多次链的延长，或再经去饱和酶的一系列去饱和作用等，完成整个生化过程［5］。其中去饱和酶是微生物通过氧化去饱和途径、生成不饱和脂肪酸的关键酶，该过程称之为脂肪酸氧化循环。 微生物利用葡萄糖经糖酵解或磷酸己糖等一系列途径合成乙酰CoA［8］。乙酰CoA羧化酶催化脂肪酸合成的第一步，是第一个限速酶。去饱和酶的生物学功能是保证生物膜的正常功能，即提供生物膜必须的流动性和基本的脂双层结构。在酵母和霉菌中存在的去饱和酶主要是酰基辅酶A去饱和酶(acyl.CoAdesaturase)(Macherel，1995)，它可将双键引入到CoA结合的脂肪酸中。铁离子参加了去饱和酶催化中心的构成(咸漠，2000)，脂肪酸去饱和酶在脂肪酰链的特殊位置引入双键，目前己发现在酵母和霉菌中存在A9、A12、A6、A15、A5位的去饱和酶，这些酶大多存在于细胞的微粒体上［9］。许多因素可影响去饱和酶的活性，如温度、pH、离子、小分子有机物等。这些因素的改变可以影响脂肪酸的组成、含量、不饱和度等［10］。 3影响微生物油脂合成的菌种因素 不同的微生物.其产生油脂的含量及油脂肪酸组成均不相同。细菌、霉菌和酵母、藻类均能产油脂，其中以霉菌和酵母为主。表1[11]、表2[11]列举了几种微生物的产油脂情况。 表1不同菌种在同样培养条件下的油脂含量 菌种 菌丝体干质it/g 油脂质it/g 含油量.％ 黑曲霉 5.529 0.2181 3.94 米曲霉 1.2486 0.15 12.01 少根根霉 2.669 0.7152 26.5 红酵母 0.506 0.306 57.73 酿酒酵母 1.232 0.395 32.06 表2不同菌种的脂肪酸组成 酿酒酵母 脂肪酸 黑曲霉 米曲霉 少根根霉 红酵母 C14:0 0.5 1.6 0.2 0.31 C15：0 0.5 0.5 0.71 Cl6：0 19.3 23.3 18 10.4 7.6 Cl6：l 1.68 50.14 C17:0 4.2 3.2 1.94 Cl8：0 6.9 8.3 6.6 10.84 3.08 Cl8：l 40.7 28.7 31.6 52.25 29.84 C18:2 31.6 30.8 32.84 2.94 1.94 4试验材料与方法入 4.1实验材料A 4.1.1菌株A 本实验室分离并保存。FR3,刺抱小克银汉霉（Cunninghamellaechinulata）；AAGEDm59、AGEDm95为菌株AGED激光诱变A株，多形单毛抱（MonoblepharispolymorphaComu）。A其中FR37-?][麻