动物细胞微丝观察教学实验的设计与探索.docVIP

龙源期刊网 动物细胞微丝观察教学实验的设计与探索作者：顾曙余 王士维 刘梅来源：《安徽农学通报》2019年第03期 ????????摘; 要：利用鼠胚传代培养细胞，制备细胞爬片，并分别运用考马斯亮蓝R250和FITC-鬼笔环肽来染色显示细胞微丝，探索和改进实验方法，以便有效观察细胞微丝的分布和形态结构。结果显示，采用鼠胚传代培养细胞作为实验材料，传代成纤维状细胞铺展良好，经固定、通透并染色后，可在普通光学显微镜和荧光显微镜下显示微丝束在细胞中的分布，既便于实验观察，也有助于学生对微丝骨架作用的理解和掌握。 ????????关键词：微丝;细胞骨架;荧光显微镜 ????????中图分类号 G642.0 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）（02-03）-0131-02 ????????Abstract：In order to improve experimental methods of the cell microfilament observation experiments，mouse embryonic subcultured cells were used as experimental materials，and well passaged on the glass coverslips.After the cells were fixed and permeabilized，cell microfilaments were stained and displayed using Coomass R250 and FITC-Phalloidin respectively.The results showed that under the bright microscope and fluorescence microscope，the cell microfilaments can be displayed more clearly and effectively.It is easy for experimental observation and helps students understand the role of the microfilament cytoskeleton. ????????Key words：Microfilament;Cytoskeleton;Fluorescence microscope ????????在細胞内，微丝是由肌动蛋白分子螺旋状聚合形成的纤维丝，而肌动蛋白又以肌动蛋白单体（或称球状肌动蛋白，G-actin）或由单体组装而成的纤维状肌动蛋白（F-actin）多聚体2种形式存在。F-actin是由多个G-actin构成的长链纤维，2条F-actin反相平行结合成螺旋链，发挥生理功能。由微丝形成的微丝束又称为应力纤维，常横贯于细胞长轴。微丝对细胞贴附、铺展、运动、内吞、细胞分裂等许多细胞功能起着重要作用，而微丝又与微管、中间丝组成真核细胞中的三维纤维网络骨架体系，这些由蛋白质聚合而成的细胞骨架主要功能包括：调节细胞内容物的空间分布，介导细胞内外的信号转导，调节细胞运动及形态。研究表明，细胞骨架的结构受到多种细胞因子的调节，细胞骨架的改变也与一些疾病的发生密切相关[1]，如囊性纤维化肺这一慢性疾病除了受到相关基因调控外，还提示与诱导增加肌动蛋白的聚合，从而促进微丝束的形成相关[2]。 ????????“动物细胞微丝的观察”是生物科学本科层次开设的实验必修项目之一，现有的教学实验参考指导书[3-5]，大多所列实验步骤较复杂，实验所用细胞及试剂材料无法购买，或在本科实验教学中显示效果不明显。近年来，笔者在细胞生物学实验教学中，利用鼠胚组织进行原代培养并成功传代培养形成的成纤维状细胞作为实验材料，开展了动物细胞骨架的标记及观察实验。实验分别采用非特异性蛋白质染料考马斯亮蓝，以及特异性荧光染料FITC-鬼笔环肽来标记染色，通过光学显微镜与荧光显微镜来观察微丝在细胞中的分布及形态特征。与考马斯亮蓝R250这一普通蛋白质染料不同，鬼笔环肽是从毒性菇类中分离的生物碱，它同细胞松弛素的作用相反，不与肌动蛋白单体分子结合，只与多聚体的F-actin结合，而用FITC或Rhodamin等荧光物质标记的鬼笔环肽可特异性的显示微丝骨架在细胞中的分布。 ????????1 实验材料 ????????实验细胞：小鼠鼠胚传代培养细胞（来源于本科学生培养的鼠胚组织原代培养细胞）。 ????????实验试剂及器材：1640培养基、小牛血清、0.25%胰蛋白酶、PBS缓冲液、4%多聚甲醛、0.1%TritonX-100、0.25%考马斯亮蓝R250、5μg/mL的FITC-鬼笔环肽、5μg