植物的原生质体培养 (2).pptVIP

关于植物的原生质体培养课件 第一页，共四十九页，2022年，8月28日 主要内容 原生质体的概念 原生质体培养的优越性 原生质体的分离 原生质体的培养 第二页，共四十九页，2022年，8月28日 原生质体(protoplast)： 指除去细胞壁的细胞或是说一个被质膜所包围的裸露球形细胞。 第三页，共四十九页，2022年，8月28日 细 胞 第四页，共四十九页，2022年，8月28日 微 丝 叶绿体 线粒体 质 膜 液 泡 细胞核 内质网 微 管 细胞壁 高尔基体 植物细胞模式图 细胞壁由三种主要成分构成 纤维素25-50%、半纤维素53%和果胶5% 第五页，共四十九页，2022年，8月28日 一、植物原生质体的特点： 1、吸收能力增强：易于摄取外来遗传物质、细胞器、细菌、病毒等；易于吸收氧、养分； 2、具有全能性：具有全套的遗传物质，具有细胞壁再生并能进行人工培养分化发育成完整植株的能力； 3、在一定条件下可诱导原生质体融合，形成杂种细胞 。 4、分泌能力提高: 去除了细胞壁的扩散障碍，使细胞膜的透过性增强，利于胞内产物的分泌。 5、稳定性较差: 失去了细胞壁的保护作用，稳定性较差，易于受到渗透压等条件变化的影响。 第六页，共四十九页，2022年，8月28日 原生质体用途 第七页，共四十九页，2022年，8月28日 原生质体培养的意义 （1）为细胞融合奠定基础。有性杂交不能进行细胞质交流。 （2）是遗传工程的理想受体。能够直接摄取外源DNA，细胞器甚至微生物。 （3）理论研究。细胞壁再生、细胞膜离子转运、病毒侵染。 因为细胞壁不仅具有保护功能，还参与细胞的生长和分化等生命活动。但是必须指出：原生质体必须再生出细胞壁才能继续发育。 第八页，共四十九页，2022年，8月28日 二、 原生质体的制备 不同的植物细胞，由于细胞壁的组成、结构和性质有所不同，原生质体的制备方法也不一样。 1、用于分离原生质体的材料准备：选取生长旺盛的细胞，幼嫩的组织。 无菌试管苗叶片 上胚轴和子叶 培养细胞（愈伤组织） 第九页，共四十九页，2022年，8月28日 2、原生质体的分离 1）、机械法：利刃机械切割 2）、酶解法：果胶酶和纤维素酶处理 第十页，共四十九页，2022年，8月28日 1）机械法  1892年首先用于藻类分离原生质体  做法：先使细胞质壁分离，再用刀把细胞壁切破，使原生质体流出或释放出来。 第十一页，共四十九页，2022年，8月28日  优点：该方法可避免酶制剂对原生质体的破坏作用。  缺点： 1) 手工操作难度大，原生质体得率低，费时费力，难以大量制备。 2）能够用此法产生原生质体的植物种类受到限制。 第十二页，共四十九页，2022年，8月28日 2）酶解法  1960年英国诺丁汉大学的科金第一次用酶解法从番茄幼苗根尖中大量制备出原生质体；  常用酶：纤维素酶类、果胶酶类、半纤维素酶、蜗牛酶等；  优点：条件温和、原生质体完整性好、活力高、得率高，而且几乎所有的植物或它们的器官组织或细胞均可用酶解法获得原生质体。  缺点：酶制剂中均含有核酸酶、蛋白酶、过氧化物酶以及酚类物质，影响所获原生质体的活力。 第十三页，共四十九页，2022年，8月28日 酶解制备原生质体过程  1)、取材预处理  2)、酶解制备  3)、原生质体收集 第十四页，共四十九页，2022年，8月28日 1）材料预处理 (暗处理，预培养和低温处理) 在酶处理前，常把供体组织置于合适浓度的稳压液中，使细胞预质壁分离约一小时后再用酶液处理。 原因：预质壁分离可使胞壁内表层充分暴露，增加胞壁降解酶与胞壁的接触面而提高胞壁降解速度；降低原生质体内电解质渗漏，防止在分离期间外来酶被吸入细胞内，降低原生质体对酶液中可能存在的有害影响的敏感，提高原生质体的稳定性和存活率。 第十五页，共四十九页，2022年，8月28日 A、酶溶剂及其渗透压 酶的种类 酶溶剂：原生质体培养基或特殊配制、PH値。 渗透压调节剂：葡萄糖、甘露醇、山梨醇等。 B、酶解时间：酶浓度及温度。 2）酶解考虑因素 第十六页，共四十九页，2022年，8月28日 酶的种类和浓度 纤维素酶（Cellulase） Onozu