细胞培养技术.pptxVIP

会计学;参考书目;本次课内容细胞培养的基本知识;一、绪论;细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。 涉及有细胞生物学、生物化学与分子生物学、动物学与植物学、病原学、肿瘤学、遗传学、生物工程学甚至光学、物理学等等学科。因其涉及面很广所以已经渗透到生命科学的各个领域。;组织培养的概念;器官培养（Organ culture）： 指的是应用和组织培养相似的条件，培养的是器官的原基、器官的一部分或整个器官，使之在体外生存、生长和保持一定功能的方法，以上三个层次的培养，又可统称之为体外培养（in vitro）。;培养法的种类;体 外 培 养 种 类;细胞培养可分为群体培养和克隆培养两种。 群体培养（mass culture）：即将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）：即将少数细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。;群体培养（左）和克隆培养（右） ;原代培养第4天，成纤维样细胞散布于培养瓶底，个别集落形成，细胞围绕中心漩涡状排列﹙×100﹚;原代培养第7天，多个集落形成并融合﹙×100﹚ ;培养法的发展;培养法的发展;哈里森悬滴培养法;卡氏瓶的发明;组织培养发展示意图 ;1957年Dulbecco 等采用胰蛋白酶消化处理和应用液体培养基的方法，获得了的单层细胞培养，单层培养成了组织培养普遍应用的技术。促进了细胞系(cell line)的建立。 近年各种条件已商品化系列化，应用冷冻技术，各国建立细胞库 ;我国组织培养的发展;组织培养常用术语;原代培养;细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物。 克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。;有分化特性??细胞系和细胞株;对细胞培养技术的评价;缺点： 1、培养细胞会发生改变； 2、对人员、设备等要求较高。 与体内主要不同 相对孤立、相对单一、缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。 主要表现 失去原有组织结构和细胞形态、分化减弱、细胞趋向单一化。 提示 要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 ;细胞培养技术的研究、观察内容;细胞培养的应用领域;病毒检验方法;检测病毒;杂交瘤技术Hybridomas;培养上清中X抗体的检测 克隆化培养;在分子生物学研究中的应用;器官移植→组织工程;组织工程;第35页/共111页;第36页/共111页;第37页/共111页;第38页/共111页;第39页/共111页;第40页/共111页;第41页/共111页;第42页/共111页;第43页/共111页;二、培养细胞的基本特征;（一）培养细胞的生长方式和类型;粘附型（贴壁型）细胞;粘附型细胞;成纤维型细胞;游走型细胞;成纤维型细胞;上皮型细胞; 培养细胞的形态不稳定，可因各种因素而发生改变，如pH、细胞密度、污染等因素。 HeLa细胞： 血清 高血清——成纤维样细胞 低血清——上皮样细胞 pH 标准pH——上皮样细胞 太酸或太碱——成纤维样细胞 细胞密度 低密度——成纤维样细胞 高密度——上皮样细胞 转化与否 未转化——成纤维样细胞 转化后——上皮样细胞;;第54页/共111页;悬浮型细胞;;第57页/共111页;培养细胞的生长特点;二、培养细胞的生长增殖过程;单个细胞的细胞周期（cell cycle） ;组织培养细胞生命期;原代培养期;传代培养期 初代培养期一经传代后便改称做细胞系cell line。 此期为三期中最长，可维持二倍体核型（二倍 体细胞系）。 当传代30～50代后，细胞增殖逐渐缓慢，以致 完全停止。 衰退期 细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态 轮廓增强，最后衰退凋亡。;体外培养细胞一代增殖生长过程;第3代BMSCs的分裂指数曲线; 接触抑制（contact inhibition）：贴壁生长的体外正常细胞一