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DNA重组技术的基本工具 专题1-1 第一页，共三十八页。 怪物 1 第二页，共三十八页。 怪物 2 第三页，共三十八页。 怪物 3 第四页，共三十八页。 怪物 4 第五页，共三十八页。 思考：以上这些构想，传统的育种方法能否实现？ 第六页，共三十八页。 这就要用到定向改造生物的新技术 ——基因工程 第七页，共三十八页。 基因工程：又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 操作对象： 操作水平： 结 果： DNA重组技术和转基因技术 分子水平 基因重组 操作环境： 主要技术： 原理（变异类型） 人类需要的生物类型和生物产品 基因 生物体外 第八页，共三十八页。 　　苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。 　　让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。 苏云金芽孢杆菌 毒蛋白 普通棉花　　抗虫棉 为什么能把苏云金芽孢杆菌的基因“嫁接”到棉花上并成功表达？ 1、所有生物的的DNA都是以4种脱氧核苷酸为基本单位，构成独特的双螺旋结构，这为不同生物DNA拼接提供了物质基础。 2、地球上的所有生物共用一套遗传密码。 第九页，共三十八页。 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 重组DNA 导入 形成 第十页，共三十八页。 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 第十一页，共三十八页。 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与运载体DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 1.1、DNA重组技术的基本工具 第十二页，共三十八页。 一、“分子手术刀”——限制性核酸内切酶 （简称限制酶） 原核生物 这类酶存在于原核生物中有什么作用呢？ 1、主要来源： 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，限制酶是一种防御工具，当外源DNA侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，使之失效，保证自身的安全。 为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 第十三页，共三十八页。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 3、作用机制： 4000种。 2、种类： 因为含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或不具备这种限制酶的识别序列，或通过甲基化酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶不能将其切开。 第十四页，共三十八页。 限制酶 特点：专一性 作用部位：磷酸二酯键 第十五页，共三十八页。 （1）黏性末端 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 4、结果： 形成两种末端 黏性末端 平末端 第十六页，共三十八页。 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 第十七页，共三十八页。 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 EcoRⅠ能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开 第十八页，共三十八页。 SmaⅠ 平末端　　　 （2）平末端 平末端　　　 SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C 和 G之间切割形成平末端 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 第十九页，共三十八页。 GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 练一练: GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 第二十页，共三十八页。 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 思考: 要想获得某个目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？一个目的基因有几个黏性末端？ 要切两个切口，产生四个黏性末端，两个。 是，会产生相同的黏性末端。 第