eb蛋白缺陷型溶瘤腺病毒对乳腺癌干细胞的作用.pptxVIP

EB蛋白缺陷型溶瘤腺病毒对乳腺癌干细胞的作用会计学第1页/共29页肿瘤干细胞肿瘤组织及肿瘤细胞系中有一部分的肿瘤细胞充当干细胞的角色，在启动肿瘤形成和维持肿瘤生长中起决定性作用。特点：自我更新，高致瘤性，多向分化　 肿瘤干细胞来源于组织正常干细胞的突变或进一步分化的短暂增生的祖细胞的突变第2页/共29页Tumor cell第3页/共29页肿瘤干细胞是肿瘤发生发展的重要细胞，目前的治疗方法可以杀死分化的肿瘤细胞，但对于肿瘤干细胞却无效，造成肿瘤的复发和转移。the drug-resistant cells 溶瘤腺病毒第4页/共29页溶瘤治疗原理:通过对自然界存在的一些致病力较弱的病毒进行基因改造制成特殊的溶瘤病毒．利用靶细胞中抑癌基因的失活或缺陷从而选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞。第5页/共29页Ramon Alemany。Cancer selective adenoviruses[J].Molecular Aspects of Medicine, 2007,28(1):42-58. 第6页/共29页 由于目前没有有效的针对肿瘤干细胞的靶向治疗，所以我们利用溶瘤腺病毒能选择性地感染肿瘤细胞，在其内大量复制并最终摧毁肿瘤细胞的特性，研究其对乳腺癌干细胞的作用，找寻根除乳腺癌干细胞的方法。 第7页/共29页技术路线图：MCF-7 细胞 病毒转染 对照组CD44，CD24流式细胞分析 微球体培养 CD44+CD24-细胞 CD44，CD24流式细胞分析 微球体形态、大小、MFE的测定 CD44+CD24-细胞 Wnt Hotch HH CXCR4等通路 正在进行中 第8页/共29页方法第9页/共29页 病毒构建 病毒感染 微球体培养 CD44+CD24-细胞表型流式(FCM)分析第10页/共29页Ramon Alemany。Cancer selective adenoviruses[J].Molecular Aspects of Medicine, 2007,28(1):42-58.微球体培养第11页/共29页 在无血清的含bFGF、EGF的培养液下培养，形成细胞微球体。这种微球体富含CD44＋CD24-/low细胞，不表达分化腔上皮、肌上皮等分化标志物，在分化条件下培养具有多系分化的能力，致瘤性也明显提高，通过微球体培养成功的分离出了乳腺癌干细胞，并成为乳腺癌干细胞体外培养的一种方法——乳腺癌干细胞的富集方法。——Ponti D, Costa A, Zaffaroni N, et al.Isolation and in vitro propagation of tumorigenic breast cancer cells with stem/progenitor cell properties[J]. Cancer Res,2005, 65(13):5506-5511.——Phillips TM, McBride WH, Pajonk F. The response of CD24(-/low)/CD44+ breast cancer-initiating cells to radiation[J]. J Natl Cancer Inst, 2006, 98(24):1777-1785.微球体培养方法第12页/共29页储存液：2× 终浓度EGF（表皮生长因子） 40ng/mlb-FGF (碱性成纤维细胞生长因子) 20ng/mlB27 0.8×胰岛素 10ug/ml 工作液既1×，用时对半稀释，但不要加血清维持PH值：。第13页/共29页结果第14页/共29页病毒对乳腺癌细胞效应 病毒感染MCF-7细胞第5天，显微镜下观察见大约30%细胞折光率好，细胞保持原有形态；而70%细胞萎缩，无折光率，呈悬浮状态,表示死亡。对照组细胞培养第5天，细胞生长良好。E1B蛋白缺陷型溶瘤腺病毒具有较强的杀伤MCF-7细胞作用第15页/共29页病毒对乳腺癌干细胞溶瘤效应MCF-7细胞加入病毒5天后CD24+细胞的比例：56.10%MCF-7细胞培养5天后CD24+细胞的比例：93.26%第16页/共29页MCF-7细胞加入病毒5天后CD44+细胞的比例：63.26%MCF-7细胞培养5天后CD44+细胞的比例：88.30%第17页/共29页MCF-7细胞加入病毒5天后CD44+CD24-细胞的比例：22.19%MCF-7细胞培养5