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- 2022-12-18 发布于北京
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henAsCas12a表达及高效纯化方法的建立
摘 要
CRISPR/Cas系统是细菌和古细菌的一种获得性免疫防御系统,enAsCas12a属于第二类CRISPR/Cas系统中Ⅴ型的A亚型,可在crRNA引导下对靶DNA进行切割。目前,CRISPR-enAsCas12已被开发为体外诊断和基因编辑的有力工具酶。Cas蛋白作为一种大分子核酸结合蛋白,纯化制备难度较为困难,现阶段广泛采用的多步纯化策略耗时长、产量低、成本高。因此,开发新型亲和层析策略将为enCas12a系统的进一步开发奠定基础。
本研究建立了基于Cl7/Im7互作的enAsCas12亲和纯化方法。首先,利用大肠杆菌表达出e
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