牛玻连蛋白(VN)ELISA试剂盒说明书.pdf

牛玻连蛋白牛玻连蛋白(VN)酶联免疫酶联免疫分析分析 牛牛玻连蛋白玻连蛋白 酶联免疫酶联免疫分析分析 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书 试剂试剂盒使用说明书盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围检测范围：： 96T 检测范围检测范围：： 15pg/ml-400pg/ml 使用目的使用目的：： 使用目的使用目的：： 本试剂盒用于测定牛血清、血浆及相关液体样本中玻连蛋白(VN)含量。 实验原理实验原理 实验原理实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛玻连蛋白(VN)水平。用纯化的牛玻连蛋白(VN) 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入玻连蛋白(VN)，再与 HRP 标记的玻连蛋白(VN)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的玻连蛋白(VN)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度 （OD 值），通过标准曲线计算样品中牛玻连蛋白(VN)浓度。 试剂盒组成试剂盒组成 试剂盒组成试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1 瓶 7 终止液 6ml ×1 瓶 2 酶标试剂 6ml ×1 瓶 8 标准品（800pg/ml） 0.5ml ×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 4 样品稀释液 6ml ×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 液 6ml ×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本标本要求要求 标本标本要求要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 （HRP ）活性。 操作步骤操作步骤 操作步骤操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 400pg/ml 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 200pg/ml 4 号标准品 150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 100pg/ml 3 号标准品 150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 50pg/ml 2 号标准品 150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 25pg/ml 1 号标准品 150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔 （空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl ， 然后再加待测样品 10µl （样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔