猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测方法的建立(1).pdfVIP

猪圆环病毒2型实时荧光定量 PCR检测方法的建立 于静;劳秀杰;陈彦永;何小江;代兵;赵阿勇;王晓杜;宋厚辉 【摘要】To develop an accurate and rapid detection method for disease screening and prevention with porcine circovirus type 2 (PCV2), a single- strand DNA virus that infects pigs, primers targeted to the ORF2 fragment of the PCV2 conserved region were designed. A real time polymerase chain reaction (PCR) method was devel-oped using SYBR Green as a fluorescent dye and serial dilutions of ORF2 recombinant plasmid to construct a standard curve for an absolute quantification. Results showed that the detection limit was obtained with 10 1 copy DNA per microliter. This method exhibited 1 000 times higher sensitivity than conventional PCR, only specific identification of PCV2, and better repeatability with the less than 2% variation coefficient of intra- or inter-assay experiments. A total of 34 PCV2 positive clinical samples were confirmed using this real time PCR method, demonstrating 100% agreement in comparison with the conventional PCR having only 50% agreement. This real time PCR method could provide a valuable tool for PCV2 prevention and control.%猪圆环病毒 2 型（porcine circovirus 2, PCV2 ），是感染猪Sus scrofa domestica 的一种单 链 DNA 病毒。建立一种快速、灵敏的检测方法，对于 PCV2 感染猪的筛选和疾病 预防非常重要。根据 PCV2 ORF2 基因保守区，设计了荧光定量聚合酶链式反应 （PCR ）引物，利用SYBR Green 作为荧光染料建立了一种定量检测 PCV2 的 PCR 方法。结果表明：该方法具有灵敏度高、特异性强和重复性好的优点，每微 升的最低检测限低至 101 拷贝 DNA。利用该方法对 34 份 PCV2 阳性临床样本进 行检测，检测符合率为 100% ，明显高于普通PCR 方法的 50.0%。因此，本研究 建立的 PCV2 实时荧光定量 PCR 检测方法为该疾病的预防和控制提供一种有效的 检测工具。图 4 表 4 参 26 【期刊名称】《浙江农林大学学报》 【年(卷),期】2016(033)002 【总页数】7 页(P357-363) 【关键词】动物学;猪;猪圆环病毒 2 型;实时荧光定量 PCR 【作者】于静;劳秀杰;陈彦永;何小江;代兵;赵阿勇;王晓杜;宋厚辉 【作者单位】浙江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物 科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300;浙 江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物 科技学院，浙江 临安 311300;浙江农林大学 动物科技学院，浙江 临安 311300 【正文语种】中 文 【中图分类】S852.3 猪圆环病毒 2 （porcine circovirus 2 ，PCV2 ），是最小的DNA 病毒，断奶仔猪 Sus scrofa domestic