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会计学; 第一节质粒（plasmid） 一．什么是质粒 [质粒]染色体外能独立复制，能稳定遗传的一种环状双链DNA分子。; 二．质粒的基本性质、分类和命名 1．质粒的分布、大小和数目 分布：细菌、酵母、霉菌和某些真核细胞 大小：106-2 ? 810 Dalton 例子： F1： 6.2?106 ColE1: 4.2 ? 106 R64: 7.8 ? 106: 四环素，链霉素抗药性; 数目 严紧型 松弛型 拷贝数 1-2/cell 10/cell 复制酶 大肠杆菌酶系 大肠杆菌酶系 F1：1-2/cell; pBR322:15-20/cell ColE1 :10-15/cell; pUC:500-700/cell ; 质粒的理化性质 具有一般核酸分子的理化性质 质粒的生物学特性 寄生性──质粒只能在宿主的细胞 内复制 稳定性──每种质粒在寄生虫细胞中总有 一定的拷贝数 同源性──不同质粒之间可能存在一定的 同源区。 ;重组性──两种不同的质粒处于同一宿主细胞 中或者一种质粒处于同一宿主中， 有可能发生质粒与质粒之间或质粒 与染色体之间的重组 不相容性──有相同复制起始区的不同质粒不 能共存于同一宿主细胞 传递性──有些质粒在细菌间能够传递、具有 转移性的质粒带有一套根转移有关 的基因。;消除性──存在于宿主细胞中的质粒，可用 某些办法将它除掉。 复制类型──松驰型质粒的复制不受宿主 细胞蛋白质合成的严格控制。 表现型──不同的质粒有不同的表型特性。; 质粒的分类 按表型效应分： ①和质粒有关的性状是多方面的 ②质粒能控制宿主的遗传性状─载体 ③一种细菌可以具有不止一种表型效应 如：a．大肠杆菌的致育的因子（F） b. 大肠杆菌素因子（COlE1）; 抗药性质粒（R） 分解性质粒：假单孢菌中发现，如分解 樟脑的质粒 特殊性质质粒：致瘤脓杆菌的质粒，寄 主植物茎部长瘤状突起 隐秘性质粒：没有表型效应; 按拷贝数分 严紧型 松弛型 转移类型： 1.转移型（接合转移）如：F因子 2.非转移型 如：ColE1 不亲和群：可在同一细菌中共存的， 为不同不亲和群; 命名 用小写字母p代表发现这一质粒的作者或实验室名称 如：pBR322，字母p代表质粒， BR是构建该质粒的研究人员的姓名，322代表…构建的一系列质粒的编号。 ;质粒的分离和纯化 细菌的培养和质粒扩增 细菌的收集和裂解 质粒DNA的纯化 ; 理想质粒载体所必需具备的条件 1.质粒较小 低分子量的质粒通常拷贝数较多 克隆时所预期的基因表物的数量较大有可能找到合适的单一限制酶切点，便于制作酶谱外源DNA容量较大,质粒小容易转化（大于15kb时，成为转化效率制约因素)操作容易掌握，容易分离，不易断裂 ; 2.带有可供选择的标记 对抗菌素的抗性，Amp, Tet, Cm, Kana, Neo ,?互补 3.带有尽可能多的单一限制性酶切位点 单一的限制性酶切位点可供外源DNA定点插入；较多不同的单一限制酶酶切位点，可有选择地供带有不同末端的外源基因插入 4.具有复制起始点 质粒DNA增殖所必不
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