土壤中分解尿素的细菌分离和计数学习.pptxVIP

土壤中分解尿素的细菌分离和计数会计学细菌脲酶第1页/共25页课题背景尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3分离产生脲酶的细菌第2页/共25页课题目的从土壤中分离出能够分解尿素的细菌土壤中尿素分解菌的分离与计数统计每克土样中究竟含有多少这样的细菌第3页/共25页思考：PCR技术要求使用耐高温的DNA聚合酶，这种酶要能忍受93 ℃左右的高温。如果请你来寻找这种耐高温的酶，你会去哪里寻找？(　)A．土壤中B．海水中　　C．热泉中D．冷库中C如何寻找耐高温的酶？ —寻找高温环境；原理：热泉70-80℃的高温条件淘汰了绝大多数的微生物，使得耐热的Taq细菌脱颖而出。选出耐高温细菌后，从耐高温菌种中提取耐高温酶。第4页/共25页一、筛选菌株（纯且活的菌种）1、自然界中目的菌株的刷选原理：在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去找。2、实验室中筛选微生物的原理：人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。第5页/共25页? KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖10.0g 尿素1.0g 琼脂15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出分解尿素的细菌？为什么？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。第6页/共25页3、方法：利用选择培养基分离选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。利用选择培养基分离微生物的方法：(1)在培养基中加入某种化学物质。例如，加入青霉素可以分离出 ； 加入高浓度的食盐可以得到 。 酵母菌和霉菌金黄色葡萄球菌这里的加入是在培养成分的基础上加入。第7页/共25页(2)改变培养基中的营养成分。固氮微生物例如，缺乏氮源时可以分离 ； 尿素作为唯一氮源时，可以分离出 石油作为唯一碳源时，可以分离出 能分解尿素的细菌能消除石油污染的微生物(3)改变微生物的培养条件。例如，将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物第8页/共25页本课题使用的培养基的配方如下：成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4 ·7H2O葡萄糖尿素琼脂水含量1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0 g1000 mL请分析后回答： (1)在该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是________和________。 (2)该培养基为____________培养基(按物理状态分)，理由是______________。 (3)想一想这种培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，又是如何进行选择的？______________________________________ ______________________________________。葡萄糖尿素固体有凝固剂琼脂有选择作用。此配方中尿素是唯一氮源，因此，只有能够利用尿素的微生物才能够生长第9页/共25页二、统计菌落数目1、方法：常用稀释涂布平板法统计活菌的数目稀释度足够高原理：?当样品的 时，培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的 。一个活菌?通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少的活菌。要求：为了保证结果准确，一般选择菌落数在 统计30～300 个菌落的平板第10页/共25页? 例：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。 你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值第11页/共25页 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是(　)A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233第12页/共25页缺点：操作复杂，实验结果有一定的误差。