雪胆短链脱氢酶原核表达及功能鉴定.docx

 雪胆短链脱氢酶原核表达及功能鉴定 摘要：【目的】雪胆富含葫芦素类化合物，对催化其骨架C3位氧化修饰的短链脱氢酶HcSDR3进行蛋白表达及功能验证。【方法】本试验以雪胆为试验材料，通过转录组测序后的功能分析及挖掘短链脱氢酶候选基因进行大肠杆菌原核表达，开展蛋白纯化及体外酶促反应，功能验证。【结果】结果表明，从扩增雪胆中找出了一条长度为840bp的HcSDR3基因，成功表达了蛋白进行了纯化，同时进行体外酶活功能验证催化底物葫芦二烯醇的C-3β-OH氧化为酮基，形成多数葫芦素的中间体骨架。【结论】本研究验证了HcSDR3它是C-3位羟基发生氧化还原反应的关键因素。验证了雪胆短链脱氢酶SDR的催化