实验九土壤微生物的分离与计数.pptxVIP

实验九土壤微生物的分离与计数会计学第1页/共10页一、实验目的1、学习利用平板分离法从土壤分离微生物的基 本操作。2、掌握微生物平板计数的方法。菌落计数培养稀释到适量浓度倾注或涂布平板第2页/共10页二、实验原理土壤是微生物生活的大本营 根据某微生物的生长条件（营养，酸碱度，温度，氧气等）而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂造成只利于该菌生长，而抑制其他菌生长；用稀释涂布平板法获得单菌落（并不能绝对保证是纯培养，需要结合观察其菌落特征、个体特征，进一步分离纯化）。第3页/共10页样品充分混匀；同一稀释度三个以上重复，取平均值；每个平板上的菌落数目合适，便于准确计数。第4页/共10页一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示原样品中的细胞数。第5页/共10页三、实验材料1、土样：选择某一生境土壤，去表层土，挖5~20cm深度 的土壤数10g，装入已灭菌的牛皮纸袋。2、培养基:牛肉膏蛋白胨培养基：细菌淀粉琼脂培养基（高氏1号）：放线菌——每300ml培养基加入1ml3%的重铬酸钾抑制细菌和霉菌生长马丁氏培养基：真菌——孟加拉红抑制细菌和放线菌第6页/共10页四、实验方法1、倒平板2、土壤菌悬液的制备10g土样 + 90ml无菌水 振荡20min3、梯度稀释 取1ml土壤菌悬液移入含9ml无菌水的试管中，吹吸均匀，为稀释10倍的样品，依次进行梯度稀释10-1~10-6第7页/共10页4、涂布：取适当浓度的稀释液涂布于相应平板，每个 稀释度做3个平行，每种菌需要做9块平板，及时 标记，涂布后静置10分钟。分离对象 稀释度 分离方法 细菌 10-6 、10-7、 10-8 0.1ml菌悬液，涂布法分离 放线菌 10-4 、10-5、 10-60.1ml菌悬液，涂布法分离 霉菌 10-2、 10-3、 10-4 0.1ml菌悬液，涂布法分离 第8页/共10页5、培养 将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于30℃培养箱中培养3-5d。6、计数7、挑菌（纯化） 将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需进一步纯化、分离。每毫升菌落形成单位＝同一稀释度的三次重复平均数×稀释倍数 ×5第9页/共10页五、思考题1、记录利用稀释涂布法对土壤样品进行活菌计数的结果。平板中的CFU数重复123平均123平均123平均稀释度细菌10-410-510-6稀释度放线菌10-210-310-4稀释度真菌10-210-310-4平板计数 每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数） 含菌样品克数