盐析法分离蛋白质.pptxVIP

会计学; 沉淀定义 沉淀特点 应用范围 沉淀分类; 盐析法 有机溶剂沉淀法 选择性变性沉淀法 等电点沉淀法 离子型聚合物沉淀法 聚电解质沉淀法 高价金属离子沉淀法;活性蛋白 非活性蛋白 理化性质 溶解度 提取方法;盐析沉淀步骤 加沉淀剂方式 陈化条件 脱盐处理;盐析机理示意图 ;;; ①盐离子与蛋白质分子争夺水分子，降低了用于溶解蛋白质的有效水量，减弱了蛋白质的水合程度，破坏了蛋白表面的水化膜，导致蛋白质溶解度下降； ②盐离子电荷的中和作用，使蛋白质溶解度下降； ③盐离子引起原本在蛋白质分子周围有序排列的水分子的极化，使水活度降低。;Cohn方程式logS=β-KsI Ks盐析 β盐析 二次盐析;图1 碳氧血红蛋白的溶解度与硫酸铵离子强度的关系图;不同蛋白质的溶解度曲线;蛋白质的盐析分布曲线;溶解度曲线(a)和盐析分布曲线(b) ;对β影响 对Ks影响 盐种类 盐浓度 温度 pH值;无机盐种类的影响;温度的影响;pH对β的影响;蛋白质起始浓度的影响;二次盐析;盐析操作;3 等电点沉淀实例;4 有机溶剂沉淀原理图;有机溶剂沉淀实例; 酵母干粉中加入0.066 mol/L磷酸氢二钠溶液，37℃水浴保温2 h，室温搅拌3 h，离心收集上清液，升温至55℃，保温20 min后迅速冷却离心去除热变性蛋白，上清液中多为热稳定性较高的醇脱氢酶。;（1）非离子型聚合物沉淀法 （2）聚电解质沉淀法 （3）金属离子沉淀法 （4）亲和沉淀 ; 凝聚技术 絮凝技术;第五章 沉淀法课后练习