一种鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 111676238 A (43)申请公布日 2020.09.18 (21)申请号 202010548746.1 (22)申请日 2020.06.16 (71)申请人 闽江学院 地址 350108 福建省福州市闽侯县上街镇 溪源宫路200号闽江学院 (72)发明人 潘铖烺　陈建明　 (74)专利代理机构 重庆市信立达专利代理事务 所(普通合伙) 50230 代理人 陈炳萍 (51)Int.Cl. C12N 15/82(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) 权利要求书2页 说明书6页 序列表1页 附图5页 (54)发明名称 一种鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法 (57)摘要 本发明属于基因功能鉴定技术领域，公开了 一种鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法，配制 重悬缓冲液，在菌液重悬过程中，重悬液的pH值 为5.8-6.0；重悬pTRV-KoPDS和pTRV1 2种菌液 时，浓度应控制在OD600 ＝1.0，再等量混合菌液， 使得pTRV-KoPDS和pTRV1 2种菌液各自的终浓度 在OD600＝0.5；结合RT-qPCR测定KoPDS的表达量， 剪取注射侵染区域的叶片，侵染叶片选择顶芽下 3-4片叶；侵染后将秋茄幼苗于28℃温室大棚正 常管理，温度不超过30℃。本发明将在红树植物 秋茄上实现内源基因的沉默，在秋茄上直接验证 基因的功能；对秋茄以及红树植物分子生物学方 A 向具有突破性意义。 8 3 2 6 7 6 1 1 1 N C CN 111676238 A 权　利　要　求　书 1/2 页 1.一种鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法，其特征在于，所述鉴定红树植物秋茄树 基因功能的方法包括： 配制重悬缓冲液，在菌液重悬过程中；重悬pTRV-KoPDS和pTRV12种菌液时，再等量混合 菌液； 结合RT-qPCR测定KoPDS的表达量，剪取注射侵染区域的叶片，侵染叶片选择顶芽下片 叶；侵染后将秋茄幼苗于温室大棚正常管理。 2.如权利要求1所述的鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法，其特征在于，所述重悬缓 冲液的配制包括：MES  195.2mg；MgCl ·6H O 203mg；ddH O定容至100ml后，加入乙酰丁香酮 2 2 2 终浓度200μM，用1mol NaOH调整pH至6.0；将重悬菌液放置28℃2-4小时后，等量混合pTRV- KoPDS和pTRV1菌液，用注射器注射入秋茄的叶片中，7天后观测光漂白现象； 配制重悬缓冲液，在菌液重悬过程中，重悬液的pH值为5.8-6.0；重悬pTRV-KoPDS和 pTRV1 2种菌液时，浓度应控制在OD600 ＝1.0，再等量混合菌液，使得pTRV-KoPDS和pTRV1 2 种菌液各自的终浓度在OD600＝0.5； 结合RT-qPCR测定KoPDS的表达量，剪取注射侵染区域的叶片，侵染叶片选择顶芽下3-4 片叶；侵染后将秋茄幼苗于28℃温室大棚正常管理，环境温度不超过30℃。 3.如权利要求1所述的鉴定红树植物秋茄树基因功能的方法，其特征在于，所述结合 RT-qPCR测定KoPDS的表达量，剪取注射侵染区域的叶片，利用EASYspin Plus Complex