蛋白质的分离纯化 (2).pptVIP

4、SDS—凝胶电泳： 第九十三页，共一百三十二页，2022年，8月28日 由于蛋白质分子吸附某种盐类离子后，带电层使蛋白质分子彼此排斥，而蛋白质分子与水分子间的相互作用却加强，因而溶解度增高 盐溶 第六十一页，共一百三十二页，2022年，8月28日 盐析：当溶液的离子强度增加到一定数值时，蛋白质溶解度开始下降。当离子强度增加到足够高时，例如饱和或半饱和的程度，很多蛋白质可以从水溶液中沉淀出来，这种现象称为盐析（salting out）。 第六十二页，共一百三十二页，2022年，8月28日 大量中性盐的加入使水的活度降低，原来溶液中的大部分甚至全部的自由水转变为盐离子的水化水。导致蛋白质表面的疏水基团的暴露 盐析（（NH4）2SO4 、 Na2SO4 ） 第六十三页，共一百三十二页，2022年，8月28日 3．有机溶剂分级分离法 与水互溶的有机溶剂(如甲醇、乙醇和丙酮等)能使蛋白质在水中的溶解度显著降低。在室温下，这些有机溶剂不仅能引起蛋白质沉淀，而且伴随着变性。 第六十四页，共一百三十二页，2022年，8月28日 有机溶剂分级分离的机理 有机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因之一是改变了介质的介电常数。水是高介电常数物质(20℃时，80)，有机溶剂是低介电常数物质(20℃时，甲醇33，乙醇24，丙酮21.4)，因此有机溶剂的加入使水溶液的介电常数降低。这样，蛋白质分子