固定化酶制药.pptx

固定化酶制药 学习目标能力目标：能判断与区分各种固定化酶的方法；知识目标：了解固定化酶的研究历史；掌握固定化酶的定义，理解固定化酶的优缺点；理解固定化酶制备的一般原则与注意事项一、游离酶的缺点 1. 酶的稳定性较差，在温度、pH、和无机离子等外界因素的影响下，容易 变性失活。 2. 酶一般都是在水溶液中与底物反应，反应结束后酶难以回收。 3. 反应结束后，酶成为产物的杂质。 二、概念固定化酶是指固定在载体上并在一定的空间范围内进行催化反应的酶。固定化酶既保持了酶的催化特性，又克服了游离酶的不足之处，具有增强稳定性，可反复或连续使用以及易于和反应产物分开等显著特点。直接固定菌体或菌体碎片的，称为固定化菌体或固定化细胞。 三、酶固定化的历史？1953年Grubhofer,Schleith以聚氨基苯乙烯固定羧肽酶、淀粉酶、胃蛋白酶1969年千畑一郎固定化氨基酰化酶，DL-氨基酸拆分1971年第一届国际酶工程大会固定化酶：Immobilized Enzyme1973年日本固定大肠杆菌生产天冬氨酸1979年日本固定化植物细胞：长春花和毛地黄细胞1982年日本固定原生质体生产谷氨酸 一、酶的固定化方法吸附法凝胶包埋法半透膜包埋法（半透膜）包埋法离子键结合法共价键结合法结合法交联法热处理法 1.吸附法吸附法是利用各种固体吸附剂将酶或含酶菌体吸附在其表面上而使酶固定化的方法。活性炭、氧化铝、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、硅胶、羟基磷灰石。 选择载体的原则：（1）要有巨大的比表面积（2）要有活泼的表面（3）便于装柱进行连续反应。优点：操作简单、条件温和、 载体廉价易得、可反复使用。 缺点：结合力不牢、容易脱落。 2.包埋法将酶或含酶菌体包埋在各种多孔载体中，使酶固定化的方法称为包埋法。载体：琼脂、琼脂糖、海藻酸、角叉菜胶、明胶、聚丙烯酰胺…… （1）凝胶包埋法：以各种多孔凝胶为载体，将酶、细胞或原生质体包埋在凝胶的微孔内的固定化方法。海藻酸：来自海藻的由D-甘露糖醛酸和L-古洛糖醛酸组成的多糖。可抑制大鼠肠道对锶(90Sr)吸收。除褐藻等海藻外，棕色固氮菌等细菌亦产生藻酸类型的多糖 。海藻酸为淡黄色粉末；无臭；几乎无味，在水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿中不溶，在氢氧化碱溶液中溶解。有助悬、增稠、乳化、粘合等作用。可用为微囊囊材，或作为包衣及成膜的材料。卡拉胶：鹿角菜胶、角叉菜胶。是从某些红藻类海草中提炼出来的亲水性胶体，化学结构是由半乳糖及脱水半乳糖所组成的多糖类硫酸酯的钙、钾、钠、铵盐。由于硫酸酯结合形态的不同，可分K型、I型、L型。在果冻，软糖，冰激凌等食品工业应用广泛。（2）半透膜包埋法（微囊）将一定量的酶或微生物包埋在具有半透性聚合物膜的微囊内。酶溶液被包裹在膜内，膜既能使酶存在于类似于细胞内的环境，又阻止了酶的脱落或直接与外环境接触。优点：结合力牢、活力回收高、底物专一性不变。 包埋法缺点：制备较难，载体无法回收、扩散限制。 ++++++++++++ 3.结合法选择适宜载体，使之通过共价键或离子键与酶结合在一起的固定化方法称为结合法。（1）离子结合法：通过离子键使酶与载体结合的固定化方法。 载体：DEAE纤维素、TEAE纤维素、DEAE葡聚糖凝胶 ……--+---++-+------+-++--+-（2）共价结合法：通过共价键将酶与载体结合的固定化方法。 载体：纤维素琼脂糖凝胶葡聚糖凝胶甲壳质氨基酸共聚物……酶分子中可以形成共价键的基团：氨基、羧基、巯基、羟基、酚基、咪唑基 共价键结合法制备固定化酶的步骤：载体活泼基团 3 载体活化的方法4. 交联法（不需载体） 交联法常用试剂：戊二醛、己二胺、顺丁烯二酸酐、双偶氮苯等，其中应用最广泛的是戊二醛。两个醛基都可以与酶蛋白质分子的游离氨基形成席夫碱，而使酶蛋白交联。（1）戊二醛具有提高生物高分子材料的寿命和强度、消毒、灭菌、防腐以及消除抗原等特性。（2）用戊二醛制备的许多种生物组织材料具有消除抗原、减小排异反应各类固定化方法的比较5、 热处理法 将酶在一定的温度下加热一段时间，使酶固定在菌体内的方法，称为热固定法。只适用于热稳定性较好的酶。固定化酶操作的注意事项活性中心：保护酶的催化作用，并使酶的活性中心的氨基酸基团固有的高级结构不受到损害，在制备固定化酶时，需要在非常严密的条件下进行。功能基团：如游离的氨基、羧基、半胱氨酸的巯基、组氨酸的咪唑基、酪氨酸的酚基、丝氨酸和苏氨酸的羟基等，当这些功能基团位于酶的活性中心时，要求不参与酶的固定化结合。酶的高级结构：要避免用高温、强酸、强碱等处理，而且有机溶剂、高浓度的盐也会使酶变性、失活，因此，操作应尽量在非常温和的条件下进行。第二节 固定化酶的性质对蛋白酶的抵抗性增强，不易被蛋白酶水解。游离酶： 固定化酶：二、固定化酶的性质对热的稳定性提高保持