+++考马斯亮蓝G-250与R-250的区别.pdfVIP

word 格式-可编辑-感谢下载支持 考马斯亮蓝G-250 与R-250 的区别 ——整理至网络 SDS实验应该用R250 考马斯亮蓝有G250 和R250 两种，在颜色索引（Colour Index ）中给出 了不同的编号（42655 和42660 ）。亮蓝G 和亮蓝 R 在冷水中分别为微溶 和不溶，在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。 两种染料均能对固定的蛋白 进行有效地染色，使用浓度为溶于甲醇:冰醋酸:水（50:10:40 ）的0.05% 溶 液。考马斯亮蓝 G250 与蛋白质的结合反应十分迅速，是常用的蛋白染料， 染色后为蓝绿色，常用来作为蛋白质含量的定量测定。考马斯亮蓝R250 与蛋白质结合虽然比较缓慢，但是染料可以穿透凝胶，染胶效果好，染色 后为红蓝色，且可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。G250 也可染胶，但染色过程慢且染色后背景高，脱色困难。 word 格式-可编辑-感谢下载支持 图为G250 分子结构式，除去红色显示的两个甲基即为R250 分子结构 考马斯亮蓝R250 （Coomassie brilliant blue R-250 ）为三苯基甲烷 (triphenylmethane)，每个分子含有两个SO3-H 基团，本身偏酸性，磺酸基 与蛋白质的碱性基团结合形成染料-蛋白质复合物。MW=824， λmax=560-590nm 。考马斯亮蓝R-250 是通过范德瓦尔键与蛋白质结合， 尤其适用于SDS 电泳微量蛋白质染色，染色灵敏度比氨基黑高5 倍。它 与不同蛋白质结合呈现出基本相同的颜色，并且在比较宽的范围内 （15-20g），扫描峰的面积与蛋白量呈线性关系。但蛋白质浓度超出一定 范围时，对高浓度蛋白的染色不符合 Beer 定律，用作定量分析时要注意 这点。 考马斯亮蓝G250 （Coomassie brilliant blue G-250）为二甲花青亮蓝 (xylene cyanine brilliant blue) ，是一种 甲基取代的三苯基甲烷。比考马斯亮 蓝R250 多二个甲基，MW=854 ；λmax=590-610nm，游离状态下呈红色。 word 格式-可编辑-感谢下载支持 染色灵敏度不如R250 ，但比氨基黑高3 倍。其优点在于它在三氯乙酸中 不溶而以胶体形式存在，能选择性地和蛋白质形成复合物，染色迅速，着 色深的蛋白质区带在数秒内即可显现出来，约45 分钟后着色最深，本底 低，重复性好，适用于定量分析。 考马斯亮蓝G-250 测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮 蓝G-250 在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm ；当它与蛋白质结合 后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm 波长下有最大光吸收。其光吸 收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马 斯亮蓝G-250 结合在2min 左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速； 其结合物在室温下1h 内保持稳定。该法是1976 年Bradford 建立，试剂 配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry 法还高4 倍， 可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL，是一 种常用的微量蛋白质快速测定方法。