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r2a培养基的配置方法
LR2a(Luria–Delbruck 随机营养土)培养基是一种常用的甜菜碱和影响细菌性状的增长培养基。它被广泛用于研究细菌的突变和多态性。它通常由四种成分,乳酸钠,甜菜碱,葡萄糖和游离硫酸钠组成。LR2a培养基的配置相对简单,但需要精确的重量和比例,以确保获得最佳的培养条件。
一、配置LR2a介质
1.将400克乳酸钠和20克甜菜碱混合在一起,然后用800毫升净水冲洗及搅拌混合物,以维持浓度和确定最佳溶解状态。
2.将80克葡萄糖和8克游离硫酸钠混合溶解于1000毫升温水中,将混合物搅拌至溶解状态。
3.将溶解的乳酸钠和甜菜碱仅添加到溶液中,并搅拌均匀。
4.增加1000毫升温水至容器中,搅拌均匀,使总体浓度大约在1×。
5.使用0.22微米过滤器对介质进行过滤,过滤后培养基完成。
6.将培养基灭菌在121°C下,大约15分钟。最后,将灭菌后的介质装入易滴式培养皿中,准备用于马可尼斯(Mackonnes)试验。
二、Mackonnes试验
Mackonnes试验是一种方法,可用于检测细菌的突变率,也叫做马克隆氏实验。它的原理是观察离散非随机表达突变。Mackonnes试验在培养介质上做出一个染色体突变,用以模拟突变发生,然后用培养皿测量培养物中突变株的比例。直观来讲,这是通过将培养皿倒置并将突变株分离出来,并用眼睛观测的方法来检测的。
三、展示突变株
当实验室成功完成Mackonnes试验后,研究者将收集到的突变株展示在显微镜下,以客观地检验是否存在突变。这并不是研究者观察到的最终结果。突变株的表型特性还需要进一步证实。通常,需要重复几次实验才能达到可靠的结论。
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