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pcr纳米微流道生物芯片制备 纳米微流道生物芯片由多个纳米微通道组成，每个通道的宽度仅仅几十纳米，在其中可以进行多种生物学应用或医学实验，具有检测敏感度高、分析效率快等特点，是一种快速分析和检测微小量生物物质的卓越工具。PCR-原位纳米流道生物芯片（PCR-NMF）是基于PCR（polymerase chain reaction）理论和纳米技术领域，采用原位技术将PCR反应与疏水芯片的纳米格局相结合的新型生物芯片技术。 PCR-原位纳米流道生物芯片中的芯片大部分由玻璃或矽介质和微型排水线组成，其上表面覆盖有一层薄的消解膜，芯片最小的纳米微通道约为30nm宽，其甲基化端可以很容易地以很容易以特有的序列形式排列成一排层。普通的PCR-NMF芯片可以容纳大约84个PCR终端，每块芯片中含有4个微流终端，每个终端可以容纳21个序列特异性polymerase，当需要大量复制及几乎瞬间完成的时候，其增幅效率能够达到94%以上。 PCR-原位纳米流道生物芯片制备大致分为标本准备、原位PCR反应、纳米溶液（reactants）喷射、排水线设计，芯片制备，PCR消化膜层制备及灭菌步骤等步骤。具体制备过程在标本准备方面，需要将检测样品封装在结囊中，然后可以使用光学显微镜或扫描电子显微镜对封装细胞进行检测，PDMS膜层加工及装载，以确保结构尺寸均良好，并进行一系列操作，如微通道的封装、样本的取样等，从而实现靶标物质的检测和鉴定。 在原位PCR反应步骤中，首先使用聚合酶链反应（PCR）的方法，分别用建库和下游剪切序列混合温和的反应溶液，建立好反应物的序列，接着使用空芯片对样品进行结构复制，形成反应溶液和空芯片，再将反应混合物滴加到PCR芯片上，使其注入到芯片的微通道中，PCR反应温度分批加热反应，就可以完成PCR反应。 随后，纳米溶液（reactants）和PCR反应液滴射，利用滴射设备，我们可以将一定量的两种溶液（reactants和PCR反应液）喷射到PCR芯片的微通道中，从而形成相应的微通溶胶，其中的溶质或荧光探针的溶质会在通溶胶中进行固定、回收和检测，从而形成相应的反应产物。 接下来，需要进行排水线设计步骤，此步骤使用芯片微结构技术，在芯片表面布置多条微排水线，以实现微量样品的收集和还原，从而使检验结果更精确。最后，PCR消化膜层的遮罩，膜层的制备可以分为两个主要步骤：一是改性黏液层，二是遮盖层，一般会采用网状模板塑膜技术，通过在瞬间的控制，在PCR芯片表面形成多个消化膜层，形成仅有10-40nm的表面，以防止样品反应产生异常，提高分析结果的精度。最后，在灭菌步骤中，使样品处于消毒和无菌条件，以防止样品被外部细菌污染，准确性和效率提供保护。