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- 2023-03-15 发布于上海
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实验一 血清蛋白质醋酸纤维素薄膜电泳
【实验目的】
了解电泳的一般原理,掌握醋酸纤维素薄膜电泳操作技术。
测定人血清中各种蛋白质的相对百分含量。
【实验原理】
带电荷的胶体粒子在电场中移动的现象称电泳。醋酸纤维素薄膜电泳法是以醋酸纤维素薄膜作为支持物。
血清中含多种蛋白质,当在pH 这 8.6 时,这些蛋白质均带负电,它们在电场中向阳极移动,由于各种蛋白质所带负电荷多少及颗粒大小不同,所以在同一电场,同一 pH 环境中涌动速度不同。
本实验以醋酸纤维素为电泳支持物,分离各种血清蛋白。血清中含有清蛋白,α~球蛋 白,β~球蛋白,γ~球蛋白和各种脂蛋白等。各种蛋白质由于氨基酸组分,立体构象,分子量,等电点及形状不同,在电场中迁移速度不同。分子量小,等电点低,相同碱性pH。
表 1 人血清中 12 种蛋白质的等电点及分子量
蛋白质名称
等电点(pl)
分子量
清蛋白
4.88
69000
α~球蛋白
5.06
α1—200000
β~球蛋白
5.12
α2—300000
90000—150000
γ~球蛋白
6.85-7.50
156000—30000
缓冲体系中,带负电喝多的蛋白质颗粒在电场中移动速度快。例如,以醋酸纤维素薄膜为支持物,正常人血清中pH=8.6 的缓冲体系中电泳 1h 左右,染色后可显示5 条区带。清
蛋白泳动最快,其余依次为α1~,α2~,β~及γ~球蛋白。这些区带经
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