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- 2023-03-15 发布于内蒙古
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硫代乙酰胺法原理
硫代乙酰胺法是一种广泛用于分析蛋白质和多肽的分子量测定技术。它是在细胞膜外、细胞内或细胞质测定蛋白质分子量的最常用的方法之一,也受到全球研究者的广泛使用。此外,硫代乙酰胺法也被用作判定聚合物蛋白质的部分聚类单位水平,以及检测抗原-抗体相互作用等研究。
硫代乙酰胺技术是基于蛋白质的特定氨基酸含量和分子量间的直接关系,以及硫代乙酰胺溶液、高压色谱法对蛋白质及多肽分子量的精确测定。具体而言,蛋白质或多肽样品施加一种硫代乙酰胺聚氧乙烯醚(Scyladon, SCYD),将抗原直接与这种抗原N-乙酰化的聚氧乙烯醚物质交联,使其分子量增加,从而形成抗原硫代乙酰胺聚氧乙烯醚(SCYD-Ag)。之后,这种SCYD-Ag含量被两种检测方法测定:比色和高压液相色谱。比色法根据SCYD-Ag与它所固定的蛋白质或多肽之间的含量比来测定,而高压液相色谱则根据SCYD-Ag的分子量与其他内比参照品的分子量之比来测定。根据比色法或高压液相色谱法,可以获得SCYD-Ag的含量和分子量,而根据这些数据可以有效的测定抗原的分子量,以及多肽的分子量。
硫代乙酰胺法的优点是:(1)不会降低抗原活性;(2)操作简单,可以在常温下进行;(3)可以经过简单的步骤测定出蛋白质或多肽的分子量;(4)该方法可以在实验室执行,操作简单;(5)可以同时完成从比色法到高压液相色谱法的完整测定;(6
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