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出口食品中主要产毒真菌检验方法 出口食品中主要产毒真菌检验方法，是对食品中潜在产毒真菌的检测和识别，是合格食品生产过程检测环节的重要内容。一般可采用培养瓶试验、生物多态参数技术（Biolog）和PCR方法来确定可能产毒或具有毒力作用的真菌。 （一）、培养瓶试验 ? ?培养瓶试验是常用的检出真菌的方法，其主要流程是离心悬液、萃取、分离、培养、鉴定等步骤。离心悬液过程中，可通过调节溶剂的酸碱度，和选择不同抗酒精等不同的培养基，来限制已知或不可知会产毒真菌的生长，以提高检测效果。然后，在培养瓶中培养、分离和鉴定，以确定试样中是否含有可能产毒的真菌，具体步骤如下： 1. 获取培养基：从市场或生产厂家购买中毒食物中主要潜在产毒真菌的培养基，例如常用的培养基有肉汁拉希德（L-R），拉希德汤（LR），Czapek-Dox，以及胡罗木斯（Lec）等。 2. 在培养瓶中培养：将培养基灌入培养瓶，将食品样品加入瓶内，加热无菌房中瓶口，并登记培养基情况，使单菌株剥离和萌发，然后在适当温度和湿度下，培养24-48小时，使菌落萌发后活化，反映真菌情况。 3. 分离筛选：将菌落取下，用清洗液（0.1%乳酸钠乳或胡罗木斯，一般为80%酒精）擦拭瓶内，对每组分离的真菌进行挑选，将记录分离的真菌的菌种和数量。 4. 鉴定：使用生物多态参数技术（Biolog）、分子生物学技术（PCR）或其他鉴定技术，对分离的菌进行检测，记录筛选的菌株具有毒力或不具有毒力的污染物。 （二）、生物多态参数技术（Biolog） ? ?生物多态参数技术（Biolog）是利用多孔玻璃片进行检测和辨认真菌类属的一种新技术，它能够通过测定真菌菌株对不同抗原的反应，来评价真菌的毒性和强度。 1. 使用多孔玻璃片：取液体样品，将其倒入多孔玻璃片上，使其落在玻璃片上并完整地充满玻璃片上所有多孔者，形成一个真菌抗原库，然后在质谱仪（Mass spectrometer）上测定。 2. 鉴定：将培养基样品和抗原库混合，发现培养基存在可能产毒真菌，然后根据生物多态参数技术（Biolog）系统，结合多孔玻璃片上生长的抗原，记录在玻璃片上的生长特征，以识别可能存在的真菌类属和活性。 （三）、PCR技术 ? ?PCR技术是以DNA或RNA为模板，以引物和逆转录酶为工具，在固定温度下通过扩增反应，实现样品DNA、RNA片段的传递检测的技术，通常用于真菌和植物的获取，用以识别畸变生长的菌株，以及检测室中食品中的毒霉菌，可以迅速达到良好的效果。 1. 使用PCR技术：取液体样品，将其加入特定体系中，均匀搅拌，将样本水分裂至溶质，进行PCR技术检测，并在适当温度下使用含有特定基因片段的逆转录酶和特定引物，在反应中形成特定基因片段，进行真菌识别。 2. 检测结果：将PCR反应液进行样品分析，通过电泳（Electrophoresis）鉴定分析得到的单色质粒的数量，记录真菌的型号和含量，判断是否有可能产毒的菌株，或者该样品是否处于污染中。