吉林大学分子生物学课件-第六、七章 分子生物学技术与技术-克隆载体+分子生物学技术与技术-基因文库与筛选.pptVIP

* Genome cut up with restriction enzyme Recombinantplasmid OR Recombinantphage DNA Bacterialclone Phage clone Phage library Plasmid library 质粒文库和噬菌体文库 * 载体类型 插入片断 (kb) 质粒 20 噬菌体 25 粘粒 45 P1噬菌体* 100 细菌人工染色体(BAC) 300 酵母人工染色体 (YAC） 1000 基因组文库 * ln (1 - P) ln (1 – f ) N= P — 给定概率 F — 插入片断大小占基因组大小的比例 例: NE.coli = ln ( 1 – 0.99 ) ln ( 1- 2×104/4.6×106 ) = 1.1×103 Nhuman = ln ( 1 – 0.99 ) ln ( 1- 2×104/3×109 ) = 6.9×105 文库的大小 * 不同载体中基因组文库的大小 Genes to Genomes, 2002 * cDNA 文库 步骤： 1) mRNA 分离、纯化和分级 分离 2) cDNA的合成 3) 与载体的连接 4) 转化 * mRNA的纯化 * cDNA 合成 * cDNA末端的处理 5’-pG