T_CBFIA 02001-2020 植酸酶耐热性测定方法.docxVIP

ICS 65·120 B 46 团 体 标 准 T/CBFIA 02001一2020 2020-01-14 发布 植酸酶耐热性测定方法 Determinati0n0ftherm0StabiIity0fPhytaSe 2020-03-01实施 中国生物发酵产业协会 发 布 I T/CBFIA 02001二2020 前 言 本标准按照 GB/T 1·1_2009给出的规则起草。 本标准由中国生物发酵产业协会提出并归口。 本标准起草单位:武汉新华杨生物股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东隆科特酶制剂有限 公司、青岛蔚蓝生物集团有限公司、北京昕大洋科技发展有限公司、江苏奕农生物股份有限公司、济南百 斯杰生物工程有限公司、青岛根源生物技术集团有限公司。 本标准主要起草人:詹志春、王晋、徐丽、王洁、刘文龙、邵静、赵丽芳、常东民、刘延杰、孟莹莹。 1 T/CBFIA 02001二2020 植酸酶耐热性测定方法 1 范围 本标准规定了以湿热法和水浴法测定植酸酶的耐热性。 本标准湿热法适用于测定固体植酸酶产品耐热性,水浴法适用于测定酶蛋白本身耐热性。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的,凡是注 日期的引用文件,仅注 日期的版本适用于本文 件 ,凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB 5009·3 食品安全国家标准 食品中水分的测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699·1 饲料 采样 GB/T 18634 饲用植酸酶活性的测定 分光光度法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3·1 植酸酶活性 PhytaseaCtiVity 在温度 37℃、PH值 5·50条件下,每分钟从浓度为 5 mmO1/L植酸钠溶液中释放 1 μmO1无机磷, 即为一个植酸酶活性单位,以 U表示。 3·2 酶活性存留率 enZymeaCtiVityretenti0nrate 处理后酶活性与初始酶活性的比值。 4 原理 4·1 湿热法:调控试样水分至 16%~18%,置于铝箔袋中高温处理,检测试样在湿热条件下的酶活性变 化 ,以酶活性存留率为指标测定酶制剂耐热性。 4·2 水浴法:将试样稀释至一定浓度,通过试管在恒温水浴锅中高温处理,检测试样在水浴条件下的酶 活性变化,以酶活性存留率为指标测定酶制剂的耐热性。 5 试剂和材料 除非另有说明,试剂均为分析纯。清洗试验用器皿不应用含磷清洗剂。 5·1 水 :符合 GB/T 6682中二级水的规定。 5·2 磷酸二氢钾(KH2PO4 ) :基准物。 5·3 乙酸缓冲液 1[C(CH3 COONa) =0·25mO1/L]:称取 20·52g无水乙酸钠于 1 000mL烧杯中,加人 2 T/犆BFIA 02001二2020 900mL水搅拌溶解,用冰乙酸调节 PH值至 5·50士0·01,再转移至 1 000 mL 容量瓶中,并用蒸馏水定 容至刻度。室温下存放 1个月内有效。 5·4 乙酸缓冲液 2[c(CH3 COONa)= 0·25 mOl/L]:称取 20·52 g无水乙酸钠,0·5 g 曲拉通 X-100 (TritOnX-100),0·5g牛血清白蛋白(BSA)于 1 000mL烧杯中,加人 900mL水搅拌溶解,用冰乙酸调 节 PH值至 5·50士0·01,再转移至 1 000mL容量瓶中,并用蒸馏水定容至刻度。室温下存放 1 个月内 有效。 5·5 底物溶液[c(C6 H6 O24P6 Na12)=7·5 mmOl/L]:称取 0·69 g植酸钠(C6 H6 O24P6 Na12 ,相对分子质 量为 923·8,纯度为 95%),精确至 0·1 mg,置于 100mL烧杯中,用约 80mL 乙酸缓冲液 1(5·3)溶解,用 冰乙酸调节 PH值至 5·50士0·01,转移至 100mL 容量瓶中,并用乙酸缓冲液 1(5·3)定容至刻度,现用 现配。 5·6 硝酸溶液:硝酸 +水 =1+2(V1 +V2 )。 5·7 钼酸铵溶液,100g/L:称取 10g钼酸铵[(NH4 )6MO7 O24 ● 4H2 O]于 50mL烧杯中加水溶解,必要 时可微加热,再转移至 100mL容量瓶中,加人 1·0mL氨水(25%)用蒸馏水定容至刻度。 5·8 偏钒酸铵溶液,2·35g/L:称取 0·235g偏钒酸铵(NH4 VO3 )于 50 mL 烧杯中,加人 2 mL 硝酸溶 液(5·6)及少量水,并用玻璃棒研磨溶解,再转移至 100mL棕色容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度。避