蔗糖酶米氏常数的测定.pptVIP

蔗糖酶米氏常数的测定第1页，共7页。 [S]1/2VMAXvVMAXKm底物浓度与反应速度关系曲线 Vmax?[S] V= Km + [S] 第2页，共7页。 第3页，共7页。 还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂反应：第4页，共7页。 【仪器与试剂】1. 仪器：分光光度计、恒温水浴、试管、吸管、秒表、坐标纸2．试剂标准葡萄糖溶液（1 mg/mL）3%蔗糖溶液（87.7 mM）0.2 mol/L NaAc缓冲溶液（pH4.6）0.5 mol/L NaOH溶液3,5-二硝基水杨酸试剂第5页，共7页。 【操作步骤】 1．葡萄糖标准曲线的制定管号012345葡萄糖标准液(mL) 00.20.40.60.81.0蒸馏水(mL)2.01.81.61.41.21.03,5-二硝基水杨酸试剂(mL)3.03.03.03.03.03.0将各管溶液混合均匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温，以蒸馏水稀释至25mL，摇匀。测540nm处A值。以葡萄糖含量（mg）为横坐标，A值为纵坐标作出标准曲线。第6页，共7页。 取试管8支编号，按下表将蔗糖溶液，醋酸缓冲液分别加入试管，于37℃水浴中保温10min。一定量酶液同一水浴中保温约10min。于各管中依次按同样间隔(0.5min)加入已保温过的酶液1.0mL，计时，立即摇匀，在37℃中准确