甲基硫菌灵对斑马鱼的肝脏和免疫毒性研究.pdfVIP

摘要 摘 要 背景：甲基硫菌灵是一种广谱性内吸杀菌剂，在世界范围内广泛使用，是 农药残留的典型例子，它可以在土壤中甚至在蔬菜和水果中检测到，然而甲基 硫菌灵对水生生物的安全性尚不清楚。因此在本研究中，我们利用斑马鱼来综 合评估甲基硫菌灵的毒性和探索具体的分子机制。 方法：1. 发育与肝脏毒性：1）斑马鱼幼鱼在6.25、12.5 和25 mg/L 甲基硫 菌灵中暴露72 - 144 hpf，而成鱼在2 、4 和6 mg/L 甲基硫菌灵中暴露28 天。2 ） 利用HE 染色观察斑马鱼肝脏的组织形态变化，运用caspase-3 和PCNA 抗体显 色确定肝脏细胞的增殖和凋亡情况，以及通过检测氧化物质（ROS 和MDA ）的 含量和抗氧化酶（SOD 和CAT ）活性判定氧化应激水平。3 ）通过PAS 和油红O 染色以及代谢物质与酶活性检测验证肝脏物质代谢功能。2. 免疫毒性：1）斑马 鱼分别在6-72 hpf 和3-6 dpf 两个时期暴露6.25、12.5 和25 mg/L 甲基硫菌灵。2 ） 主要运用多种特异性标记各种免疫细胞的转基因鱼系，rag1 全胚原位杂交技术 和荧光定量PCR 检测免疫细胞关键基因的表达等方法评估甲基硫菌灵对各种免 疫细胞的毒性。 结果：1. 12.5 和25 mg/L 甲基硫菌灵会阻碍斑马鱼的正常发育并引起严重的 肝脏毒性，分子机制是通过激活氧化应激和 caspase-3，从而引发肝毒性，随后 导致斑马鱼肝脏糖原代谢和脂肪代谢发生紊乱。2. 12.5 和25 mg/L 甲基硫菌灵通 过激起氧化应激进而较特异性地诱导斑马鱼胚胎胸腺和 T 细胞发育缺陷（如胸 腺体积减少，T 细胞缺少，T 细胞标记基因rag1 ，ikaros 表达显著下降等），而 不影响包括嗜中心粒细胞和巨噬细胞的先天性免疫细胞。3. 水溶性钆金属富勒 烯是一种独特的抗氧化纳米材料，能够有效地降低甲基硫菌灵暴露所引起的氧 I 摘要 化应激，并且可以很好地缓解甲基硫菌灵所诱导的发育、肝脏和免疫毒性。 结论：我们首次较全面的评估了甲基硫菌灵对斑马鱼的发育、肝脏和免疫 毒性，并探究了甲基硫菌灵主要是通过引起机体的氧化应激从而诱导毒性的发 生，以及充分证明了水溶性富勒烯纳米材料可以有效缓解甲基硫菌灵的毒性， 这将有益于全面理解甲基硫菌灵所带来的健康风险问题以及治疗甲基硫菌灵所 引起的毒害作用。 关键词：甲基硫菌灵；肝脏和免疫毒性；氧化应激；钆金属富勒烯；斑马鱼 II 目录 目 录 第1 章 引言 1 1.1 甲基硫菌灵 1 1.2 甲基硫菌灵的环境残留与毒性研究进展 2 1.2.1 甲基硫菌灵的环境残留 2 1.2.2 甲基硫菌灵的毒理研究进展 2 1.3 斑马鱼与环境毒性研究 4 1.3.1 斑马鱼模式生物 4 1.3.2 斑马鱼肝脏与环境污染物的肝毒性研究 5 1.3.3 斑马鱼免疫系统与环境污染物的免疫毒性研究 6 1.4 氧化应激与金属富勒烯的研究与应用 7 1.4.1 氧化应激在毒理学中的作用 7 1.4.2 金属富勒烯的研究与应用 8 1.5 选题目的和意义 9 第 2 章 材料与方法 10 2.1 实验材料 10 2.1.1 实验动物和动物饲养 10