弘毅班第三组环境水样品中大肠杆菌的检测.pdfVIP

环境水样品中大肠杆菌和耐热大肠杆菌的检测 实验成员：李文灏（2011302630027 ）徐雯静（2011302630010 ）莫斯棋 （2011302630030 ）盛天晨（2011302630034 ）（排名不分先后） 实验单位：2011 级弘毅班 第三小组 【摘要】随着人类社会的发展，环境问题越来越严重，其中水质安全引人注目。本实验采用测水中总大 肠菌群和耐热大肠菌群数量来检测水样品污染程度。实验通过多管发酵法来测定水中大肠菌群数量，伊红 美蓝划线法来判断大肠杆菌，最后用革兰氏染色法镜检对东湖水中总肠道菌群进行检测。在检测大肠杆菌 的同时，了解到与我们息息相关的生活环境中东湖水质的污染情况，为保护水质提供参考。 【关键词】总大肠菌群 耐热大肠菌群 多管发酵法 伊红美蓝平板培养 革兰氏染色 最大或然数法 前言：水中细菌数量是水质状况检验尤为重要的一个指标。因此要检验水质是否符合卫生标准，需 要进行对水中细菌数量进行检测，尤其是大肠杆菌。每升水中的总大肠菌群称为总大肠菌群指数。大肠杆 菌是肠道最普遍存在和数量最多的一种细菌，所以将其作为粪便污染的标志。总大肠杆菌群是以 E.coli 为 代表的杆状，无芽胞、需氧或兼性厌氧、革兰氏染色阴性，经 37℃条件下培养 24~48h 可发酵乳糖产酸产 气并区别与其他肠道菌，属于易于测定的一类细菌。我国饮用水卫生标准（GB5749—85 ）规定每毫升水样 细菌总数 37 摄氏度培养 24h 不得大于 100 个。测定总大肠杆菌群的方法有多管发酵发、膜过滤法和各种各 样的快速、简便的微生物检测仪或试剂纸（盒或卡）等。多管发酵法为我国大多数环保、卫生和水厂等单 位所采用，多管发酵法包括：初发酵试验、平板分离和复发酵试验。 一．原理 1.初发酵实验：发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置杜氏小套管。 乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸 产气。为便于观察细菌的产酸情况，培养基内加有溴甲酚紫作为平 pH 指示剂， 细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色。溴甲还有抑制其他细菌如芽孢杆 菌的生长的作用。 2.45 ℃培养鉴定：37℃下培养产生阳性反应的试管样品不一定是全部都是粪 大肠杆菌，经过 45 ℃下培养，若还能产生阳性反应的即可能为耐热大肠杆菌（耐 热性较好）。 3.平板分离：伊红美蓝琼脂平板含有伊红和美蓝染料，在此亦作为指示剂， 大肠菌群发酵乳糖造成酸性环境时，该两种染料即结合成复合物，使大肠菌群产 生带核心的、有金属光泽的深紫色（龙胆紫的紫色）阳性菌落。 4.革兰氏染色：大肠杆菌为革兰氏染色阴性菌，经过革兰氏染色后在显微镜 下显示为红色杆状（有的能观察到芽胞）。 二．材料与方法 1 1.水样来源： 中 国 湖 北 省 武 汉 市 武 昌 区 东 湖 水 样 ， 如 下 图 2.培养基的使用，配制及器具的准备：  乳糖蛋白胨培养液 15 支  EC 肉汤培养液  伊红美蓝培养基一瓶（150ml）  4.5 mL 无菌水  所用乳糖蛋白胨、EC 肉汤培养基和伊红美蓝培养基有预混成品，依据产 品说明直接配制即可不需要单独伊红美蓝培养基（固体）：1 瓶（150 mL）；  无菌 1 mL 移液管  40~200 微升移液器、吸气：5 只；  200 微升无菌 Tip 一盒  培养皿 3 个  革兰氏染色试剂：结晶紫染液，革兰氏碘液、脱色剂（95% 乙醇）、沙黄 复染液；  培养箱：37℃ 恒温培养箱和 45 ℃恒温培养箱；  无菌载玻片、培养皿若干；  盖玻片；接种环；显微镜；酒精灯；试管架；采样瓶等仪器。 3.实验方案： （1）样品的稀释和培养： 2 -1 1. 取原环境水样 0.5ml 加入到 4.5ml 无菌水中，混合均匀，制成 10 样品；