生化实验质粒DNA提取.pptVIP

溶液2：裂解细菌，变性DNA和少量蛋白质 溶液2（新鲜配制）：0.2M NaOH 1% SDS NaOH:破解细胞（瞬间溶解细胞膜，细胞膜发生从双层膜结构到微囊结构的变化），释放DNA，使蛋白质变性。DNA在5PH9的溶液中是稳定的，但当PH3或PH12时，就会引起双链之间的氢键解离而变性。溶液2中的NaOH的浓度为0.2M，加到提取液中时，该系统的PH12，因而促使染色体DNA和质粒DNA的变性。 为什么要新鲜配制？ 为什么采用NaOH? 第二十八页，共四十三页，2022年，8月28日 SDS：是一种离子型表面活性剂，其主要功能是溶解细胞膜上的脂质和蛋白质，因而溶解膜蛋白，破坏细胞膜；解聚细胞中的核蛋白；SDS能与蛋白质结合，使蛋白质变性而沉淀下来，为后续处理需要。 注意： 1、处理时间不能过长；否则碱性条件下基因组DNA会慢慢断裂 2、温柔混合；避免机械剪切导致已经变性的基因组DNA断裂 SDS:十二烷基硫酸钠 第二十九页，共四十三页，2022年，8月28日 溶液3：是大部分蛋白质和细菌基因组DNA沉淀 溶液3（PH=4.8）：0.5M 60ml KAC 11.5ml冰醋酸 28.5ml 水 本质上是KAC-HAC的缓冲液；用PH=4.8的溶液3是为了把强碱性的提取液调回至PH中性，使变性的质粒DNA能够复性并稳定存在 第三十页，共四十三页，2022年，8月2