细胞工程第五章细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 设计方案： 动物细胞融合 创始人：米尔斯坦 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 第三十页，共八十三页，2022年，8月28日 单克隆和多克隆抗体的比较和用途 特异性 敏感性 均一性 McAb PcAb 低 差 无 高 强 有 1、用于免疫学检测，辅助临床诊断 2、McAb用于亲和层析，分离微量可溶性抗原 3、标记的McAb用于基础研究，了解细胞分化等 4、制备生物导弹用于肿瘤、移植等的临床治疗。 第三十一页，共八十三页，2022年，8月28日 单克隆抗体在医学中的应用 检验医学诊断试剂 （1）病原微生物抗原抗体的检测 （2）肿瘤抗原的检测 （3）免疫细胞及其亚群的检测 （4）激素测定 （5）细胞因子的测定 蛋白质的提纯 肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术 酶 标 仪 第三十二页，共八十三页，2022年，8月28日 动物细胞融合技术 B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤 只有杂种细胞才能活 动物细胞培养 五、单克隆抗体制备过程 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 筛选阳性杂交细胞 HAT培养基 单抗的纯化、检测 第三十三页，共八十三页，2022年，8月28日 动物细胞融合技术 B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤 只有杂种细胞才能活 动物细胞培养 五、单克隆抗体制备过程 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 筛选阳性杂交细胞 HAT培养基 单抗的纯化、检测 第三十四页，共八十三页，2022年，8月28日 B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤 只有目的杂种细胞才能活 HAT培养基 第三十五页，共八十三页，2022年，8月28日 HAT选择培养基 HAT选择培养基组分 次黄嘌呤核苷酸（hypoxanthine,H) 氨甲喋呤（aminopterin,A)（二氢叶酸还原酶抑制剂） 胸腺嘧啶核苷酸（thymidine,T) 第三十六页，共八十三页，2022年，8月28日 细胞DNA合成途径 1.主要途径： 氨 基 酸 谷 氨 酰 胺 尿核苷单磷酸 叶酸及其衍生物（必不可少的媒介） 2.补救途径：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 （HGPRT） 胸腺嘧啶核苷酸激酶（ TK） 原料：次黄嘌呤核苷酸（H）、胸腺嘧啶核苷酸（T） 第三十七页，共八十三页，2022年，8月28日 B 、B×B 、 B ×瘤 — 、 瘤— ×瘤— 、瘤— 只有目的杂种细胞才能活 HAT培养基 × × × × HGPRT— / TK— √ 第三十八页，共八十三页，2022年，8月28日 8-杂氮鸟嘌呤 Br-脱氧嘧啶核苷 HGPRT— TK— 第三十九页，共八十三页，2022年，8月28日 筛选阳性杂交细胞 酶联免疫吸附测定ELISA 第四十页，共八十三页，2022年，8月28日 第四十一页，共八十三页，2022年，8月28日 免疫标记技术 放射物标记技术 酶标技术 免疫荧光技术 其他标记技术 酶联免疫吸附技术 酶免疫组化技术 双抗体夹心法 竞 争 法 双抗原夹心法 间 接 法 双位一点法 第四十二页，共八十三页，2022年，8月28日 第四十三页，共八十三页，2022年，8月28日 ELISA原理 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性 结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关 第四十四页，共八十三页，2022年，8月28日 ELISA基本的实验过程 包被：将已知抗原或抗体通过物理吸附到固相载体表面，使抗原或抗体固相化 抗原抗体反应：先后加入被检标本和酶结合物，使之与固相抗原或抗体发生免疫反应而被结合固定 酶促反应：在反应体系中加入酶作用的底物，使发生酶促反应而显色 第四十五页，共八十三页，2022年，8月28日 第四十六页，共八十三页，2022年，8月28日 封闭 第四十七页，共八十三页，2022年，8月28日 第四十八页，共八十三页，2022年，8月28日 第四十九页，共八十三页，2022年，8月28日 第五十页，共八十三页，2022年，8月28日 第五十一页，共八十三页，2022年，8月28