(1)--乳酸脱氢酶及辅酶的作用生物化学.ppt

乳酸脱氢酶及其辅酶的作用 实验目的 1. 掌握酶蛋白与辅酶的关系。2. 掌握组织中酶蛋白及辅酶提取的方法。3. 了解乳酸脱氢酶及同工酶的临床意义。 背景知识-酶的构成1. 单纯酶（simple enzyme）：仅含有肽链的酶称为单纯酶2.缀合酶（conjugated enzyme）：由酶蛋白和辅助因子共同构成的酶 3.辅助因子（cofactor）：分为辅酶和辅基 缀合酶酶蛋白：决定反应的特异性及催化机制 辅助因子：决定反应的性质和反应类型全酶 辅酶或辅基转移的基团NAD+或NADP+氢原子和电子FMN或FAD氢原子和电子TPP醛基磷酸吡哆醛氨基辅酶A酰基生物素CO2四氢叶酸一碳单位甲基钴胺素/5-脱氧腺苷钴胺素甲基/相邻碳原子上氢原子、烷基、羧基的互换 背景知识-乳酸脱氢酶 实验原理背景知识-乳酸脱氢酶 背景知识-乳酸脱氢酶同工酶（isozyme）：催化相同的化学反应，但酶蛋白的分子结构、理化性质和免疫学特点各不相同的一组酶。 背景知识-乳酸脱氢酶LDH同工酶红细胞白细胞血清骨骼肌心肌肺肾肝脾LDH14312270731443210LDH2444934.70243444425LDH3123320.95335121140LDH41611.7160512720LDH5005.7790120565人体各组织器官LDH同工酶谱（活性%） 背景知识-乳酸脱氢酶 实验原理乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase, LDH） NADH + H+NAD+ 丙酮酸 COOHC=OCH3乳酸 COOHCHOHCH3kCN丙酮酸氰醇MBMBH2 操作步骤-辅酶I溶液的制备 1/3大试管的肌肉匀浆沸水浴5min倒入研钵磨成细浆配平后离心3000rpm，5min收集上清 转入小试管辅酶Ⅰ 操作步骤-乳酸脱氢酶蛋白提取法2小试管肌肉匀浆配平后离心3000rpm，8min收集上清置于一支大试管滤液即为酶蛋白提取液加半匙活性炭，充分混匀约3min 操作步骤3.取三支试管，按下表加入试剂123乳酸脱氢酶蛋白提取液ml辅酶I提取液0.5%氰化钾溶液5%乳酸钠溶液（mL）0.01%亚甲兰溶液蒸馏水1-10滴0.55滴11110滴0.55滴--110滴0.55滴1摇匀液体石蜡8 滴8 滴8 滴酶蛋白辅酶I全 酶 14 Page注意事项1.KCN为剧毒，切勿用嘴吸取，以免吸入口中。2.加入蒸馏水后各管摇匀，加入液体石蜡后切勿再摇。3.离心前，要配平 感谢聆听