解钾功能真菌促进小麦根部钾离子运输机制的初步研究.pdf

解钾功能真菌促进小麦根部钾离子运输机制的初步研究 中文摘要 植物-微生物在长期进化过程中形成的互馈调控作用维系了生态系统的稳定性，为生态 系统内所有生物适应环境和进化提供了重要保障。当土壤处于低钾或者缺钾时，植物通过 感知外部钾离子浓度的变化产生而物理化学信号，质膜传递信号到细胞质中，并最终通过 调节钾离子通道和转运蛋白加速钾离子吸收与转运。而植物根际微生物通过加速释放固态 钾，诱导植物根部钾离子运输相关基因的上调表达，协助植物应对钾胁迫。 论文以实验室分离获得的部分功能菌株，通过皿内实验证明其具有解钾、降解纤维素 和溶磷功能。在离体条件下，以小麦为实验材料，采用分子生物学、生物信息学以及共转 录组学等技术，分析了解钾功能真菌PBI121-GFPHC.4侵染小麦后与钾离子相关基因的差异 表达情况。初步明确了解钾功能真菌PBI121-GFPHC.4协助实验材料小麦应对菌株侵染的分 子机理，揭示了与钾离子转运相关的分子机制。通过一系列实验以及后续的RNA-seq 测序 数据分析取得了如下主要结果： 1 21 （）通过测序比对分析本实验室分离得到的微生物，明确了 株功能细菌，分别是解 钾功能菌9株；降解纤维素功能菌6株；解磷菌6株。明确了真菌类分别是具有解钾功能的木 2 霉属和曲霉属 种。 （2）利用DNA重组技术，将携有卡那霉素抗性基因的PBI121-GFP质粒转化到HC.4感 HC.4 PBI121-GFPHC.4 受态细胞中，成功获得了能表达绿色荧光蛋白的 菌株，进一步比较了 菌株与野生型的HC.4菌株的生长。发现质粒PBI121-GFP可以再HC.4菌株中稳定表达，并且 对HC.4菌株的生长没有显著影响。因此可以作为野生型HC.4菌株的代替品，用于后续在实 验材料小麦根部定殖，有利于标记追踪的研究。 3 RNA-seq PBI121-GFPHC.4 （）利用 技术，分析小麦根部侵染 菌株的孢子悬浮液后， 小麦根部基因表达的差异。KEGG功能富集分析发现上调表达基因显著富集在植物激素信 号转导（Planthormonesignaltransduction）、MAPK信号通路-植物（MAPKsignalingpathway -plant Starchandsucrosemetabolism ）、淀粉和氨基糖和核苷酸糖代谢 （ ）等代谢通路。本 论文主要分析了筛选得到的上调表达基因，通过KEGG代谢通路富集分析发现这些上调表 map04075 达基因主要富集在植物激素信号传导途径 （ ）。在植物激素信号传导途径中，分 I 析发现上调的差异表达基因主要参与了乙烯代谢途径、生长素代谢途径、细胞分裂素代谢 途径、赤霉素代谢途径等。当PBI121-GFPHC.4菌株侵染定殖到小麦根部后，刺激小麦体内 的激素信号传导，促进了小麦根的形态学建成。另外，还分析了MAPK信号通路植物信号- 传导途径同样有利于小麦的侧根的生长，因此从不同信号转导途径分析了小麦根的生长发 育，扩大了小麦根部钾元素吸收面积，共同有利于小麦根部钾元素的吸收。从侧面解析了 解钾功能重组菌株PBI121-GFPHC.4促进小麦根部钾元素的吸收。 （4）重组菌株PBI121-GFPHC.4诱导钾离子通道蛋白相关基因上调表达，进而促进小 麦根部钾元素吸收。以真菌为参考序列，利用比较转录组学的方法，研究了无菌水处理的 小麦 （HC.CN.1），重组菌株PBI121-GFPHC.4侵染过的小麦 （HC.EG.2），生长在PDA平 PBI121-GFPHC.4 HC.4