分子生物学研究策略基因表达技术月日.pptxVIP

第1页/共106页分子生物学研究策略基因表达技术月日第2页/共106页**基因表达系统1、大肠杆菌表达系统2、芽孢杆菌表达系统3、乳酸菌基因表达系统4、链霉菌基因表达系统5、酵母菌表达系统6、丝状真菌表达系统7、昆虫表达系统8、哺乳动物细胞表达系统9、植物生物反应器第3页/共106页1、大肠杆菌表达系统（Gene Expression system in E.coli）1）大肠杆菌表达系统 的特点：（1）遗传背景清楚（2）目的基因表达水 平高（3）培养周期短（4）抗感染能力强第4页/共106页2）大肠杆菌表达系统研究的发展趋势完善现有的表达系统；重组蛋白质的正确折叠；构象形成；蛋白质的分泌；菌体表面表达技术及其应用；重组蛋白质修饰加工。第5页/共106页真核基因在不同表达系统的表达表达白细胞介素IL-3(成熟蛋白) 大肠杆菌表达系统20-30u 地衣芽孢杆菌表达系统250-300u 酵母菌表达系统20u 哺如动物细胞2u第6页/共106页 2、芽胞杆菌表达系统（Gene Expression system in Bacillus）1）特点枯草芽孢杆菌是非致病的土壤微生物，严格生长在有氧条件下。枯草芽孢杆菌遗传学相当先进，很多噬菌体和质粒适合用作克隆载体。芽孢杆菌可大量产生几种商品酶，如?-淀粉酶，蛋白酶及苏云金杆菌的杀虫晶体蛋白等，发酵技术发达。具有单层细胞膜组成较简单的细胞外壳。 易于分离纯化分泌蛋白第7页/共106页2）枯草杆菌宿主菌株 由于大肠杆菌的CaCl2转化法对枯草芽孢杆菌无效（1）选择可转化的菌株 *168菌株及突变体： 营养要求、芽孢形成和萌发、蛋白酶缺失、重组缺陷、限制/修饰系统缺陷、转座子插入（2）选择转化的方法感受态转化：原生质体转化：电转化：甘氨酸添加培养感受态其它方法，如转导、结合转移第8页/共106页3）、可作为宿主的其它菌种：嗜碱芽孢杆菌Bacillus abcalophilus 蛋白酶淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefacilus ?-淀粉酶短芽孢杆菌Bacillus brevis地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis 淀粉酶，抗真菌肽巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium 淀粉酶短小芽孢杆菌Bacillus pumilus 蛋白酶第9页/共106页球形芽孢杆菌Bacillus sphaericus 灭蚊毒素蛋白嗜热芽孢杆菌Bacillus stearothermophilus 高温?-淀粉酶苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis 杀虫晶体蛋白耐碱的芽孢杆菌Bacillus alcalophilic 碱性蛋白酶炭疽芽孢杆菌 Bacillus anthracis第10页/共106页4）枯草芽胞杆菌表达系统研究的发展趋势 1、表达真核基因 蛋白酶水解——缺陷型、抑制剂 2、表达商业用酶 克隆基因的整合 3、表达杀虫晶体蛋白 提高杀虫毒力，减少杀虫时间，增加广谱 4、利用芽孢杆菌基因工程技术扩大和加 强在医药领域多个方面的应用第11页/共106页3、乳酸菌基因表达系统（Gene Expression system in Lactic Acid Bacteria）1）特点：乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。大多数不运动，少数以周毛运动。菌体常排列成链。在其发酵产物中只有乳酸的称为同型乳酸发酵，而产物中除乳酸外还有较多/wiki/%E4%B9%99%E9%85%B8乙酸、/wiki/%E4%B9%99%E9%86%87乙醇、/wiki/CO%EF%BC%92CO/wiki/CO%EF%BC%92２等物质的称为异型乳酸发酵。有微好氧菌和专性厌氧菌。第12页/共106页Lactic Acid BacteriaGenera:StreptococcusLeuconostocPediococcusLactobacillusEnterococcusLactococcusAll the above genera growin chains.Many are used for the foodindustry.第13页/共106页2）理想乳酸菌表达载体的特征：1、稳定的遗传、传代能力（复制子）2、具有显性的转化筛选标记（Emr ）3、启动子的转录是可以调控4、具有多克隆酶切位点第14页/共106页3）研究进展（1）食品发酵方面的应用第15页/共106页（2）乳酸菌菌种鉴定REA （Restriction Endonuclease Analysis）16S rRNA （PCR ）SDS第16页/共106页（3）抗微生物和食品腐败第17页/共106页（4）细胞表面层和外多糖利用生物异构化方法从亚油酸生产具有生理活性的共