DB15T 1517-2018从红豆草中提取纯化缩合单宁的方法.pdfVIP

ICS 65.020.01 B 04 备案号：61229-2019 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1517—2018 从红豆草中提取纯化缩合单宁的方法 Method for Extraction and Purification of Condensed Tannins from Sainfoin(Onobrychis viciifolia Scop.) 2018-12-20 发布 2019-03-20 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 材料与试剂 2 5 仪器与设备 2 6 材料的准备 3 7 溶液的配制 3 8 缩合单宁的提取 3 9 缩合单宁的纯化 3 10 注意事项 4 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC19）归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院兽医研究所、中国农业科学院草原研究所。 本标准起草人：刘秀丽、侯勇跃、李锋、裴乐、李元恒、卢岩、阿木古楞。 从红豆草中提取纯化缩合单宁的方法 1 范围 本标准规定了红豆草中缩合单宁提取和纯化的方法。 本标准适用于实验室研究和提取阶段的中型试验。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 15686 高粱 单宁含量的测定 3 术语和定义 下列术语定义适用于本文件。 3.1 单宁 tannins 又称单宁酸、鞣酸，是植物以碳为基础的复杂酚类次生代谢产物，分子量在500～3000 Da 。普遍存 在于植物茎，叶，树皮，花和种子的细胞壁和液泡之中。 3.2 缩合单宁 condensed tannin，CT 又称原花青素，是由黄烷-3-醇通过碳-碳双键连接构成的缩合物。 3.3 提取 extraction 选择适当的溶剂和方法将所要的目标成分溶解出来，并同原材料分离的过程。本方法是利用相似相 溶原理通过有机溶液浸提法将红豆草中缩合单宁分离出来。 3.4 纯化 purification 利用凝聚过滤法根据分子筛原理按分子物质大小进行分离。 3.5 凝胶活化 gel activation 干燥的商品凝胶颗粒，使用前在欲使用的洗脱液中进行浸泡溶胀。 3.6 凝胶过滤 gel filtration 利用凝胶的三维网状结构分子筛的过滤作用，将化合物按分子量大小不同进行分离。 4 材料与试剂 4.1 材料 红豆草（Onobrychis viciifolia Scop.）：红豆草所含缩合单宁主要集中于叶片内且随着红豆草 物候期的成熟缩合单宁含量逐渐下降，建议采集孕蕾期的红豆草材料，人工齐地刈割，适量置于保温箱 内。 4.2 试剂 4.2.1 除非另有说明，在方法中使用的试剂均为分析纯，实验室用水应符合GB/T 6682 中三级水的要 求。 4.2.2 丙酮。 4.2.3 无水乙醇。 4.2.4 抗坏血酸。 4.2.5 乙醚。 4.2.6 葡聚糖凝胶Sephadex LH-20 （吸水率为2.5 mL/g）。 5 仪器与设备 5.1 旋转蒸发仪（转速范围20～280 rpm，温度范围室温±5 ℃～180 ℃）。 5.2 真空冷冻干燥机（冷阱温度能达到-50 ℃左右，建设采用仪器FreeZo