化学发光免疫标记分析技术基本原理.pptxVIP

第1页/共27页化学发光免疫标记分析技术基本原理第2页/共27页抗原抗体免疫反应特点高特异性 抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。抗原抗体反应的高特异性是免疫学检测的基础。高亲和性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合牢固，不易解离。 第3页/共27页免疫学检测免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用。它包括：抗原抗体的检测技术免疫细胞的检测细胞因子的检测免疫相关基因分析免疫标记技术免疫PCR(IM-PCR)技术 杂交瘤技术与T细胞克隆技术第4页/共27页1977年诺贝尔生理学或医学奖得主雅洛 Yalow 雅洛1921年出生于纽约，1945年获得核物理学博士学位，1975年当选美国科学院院士。因为发明了放射性免疫分析法，雅洛获得1976年的拉斯克基础医学奖，成为历史上第一位获得该奖的女性科学家。次年，她因为与同事合作开发了“针对多肽类激素的放射性免疫分析法”而成为诺贝尔生理学或医学奖史上第二位女性获奖者。60年代第5页/共27页70年代90年代免疫分析标记技术的发展放免酶免发光第6页/共27页物质激发态吸收光谱吸能放能发射光谱物质基态化学发光化学发光：由于化学反应（通常是氧化）底物从基态跃迁为激发态，激发态返回基态时，跃迁能量以光子形式释放的现象。光谱产生过程基本原理第7页/共27页化学发光免疫分析技术化学发光免疫分析技术是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。美国临床化学会议规定：凡是通过测量光子计数的方法都是化学发光，包括通过酶促luminol发光。化学发光免疫分析1980’s进入体外诊断领域，第一台全自动检测仪1993年诞生。第8页/共27页发光免疫分析基本操作步骤(一步法) 待测样品标记抗体或抗原包被抗体或抗原的磁珠或反应管反应15-60分钟洗涤去除未结合的反应物反应0-5分钟发光底物（或发光剂）仪器检测第9页/共27页OCO2-HRPNHH2O2++Photon (425nm)NHOH-N2CO2-NH2ONH2增强剂（Enhancer）OH NRBROHOHOHSR鲁米诺化学发光系统 鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物 第10页/共27页CH3CH3CH3N+NNOH-H2O2+ H2OH+HOHOOC=OC=OC=OOOORRRCH3CH3OHNN光子 + CO2 ++C=OOORO吖啶酯化学发光系统吖啶酯化学发光系统第11页/共27页OCH3OOO-碱性磷酸酶化学发光系统 金钢烷（发光底物）及其衍生物的增敏化学发光系统OOOOOCH3OCH3APOPO32-O-*碱性磷酸酶及其衍生物的化学发光系统光子(477nm)+第12页/共27页化学发光的检测类型化学发光按化学反应类型分为：直接化学发光（非酶促化学发光）吖啶酯系统异鲁米诺系统间接化学发光（酶促化学发光）辣根过氧化物酶—鲁米诺系统（HRP系统）碱性磷酸酶—金刚烷系统（AP系统）其它电化学发光第13页/共27页直接化学发光直接化学发光：以化学物质,如异鲁米诺、吖啶酯等直接标记抗原或抗体，免疫反应后，直接引发化学发光反应进行检测。产品：吖啶酯标记 : 西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000异鲁米诺标记 ：索林DiaSoin Liaison 新产业第14页/共27页间接化学发光以碱性磷酸酶系统为例间接化学发光：用参与发光反应的酶来标记抗原或抗体，免疫反应后，加入发光底物，测定发光体系的发光强度来进行抗原或抗体的检测。两大反应体系：辣根过氧化物酶（HRP）系统：氧化还原反应，稳定性差源德、科美、安图碱性磷酸酶（AP）系统：水解反应，灵敏度较高贝克曼：Access 1、Access 2，DXI600、DXI800西门子：Immulite1000 , Immulite 2000达成生物：AULIN200第15页/共27页电化学发光电化学发光：一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，直接由三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 标记抗体，反应时标记物直接发光。产品：Roche：Elecsys2010、COBAS e411、COBAS e601第16页/共27页化学发光的发展史第一代：鲁米诺及其衍生物第二代：直接标记：吖叮酯标记间接标记：碱性磷酸酶-金刚烷系统电化学发光：三联砒啶