医学免疫学实验.docx

医学免疫学实验 （一） 实验室规则 ■穿好工作服。需要时严格进行无菌操作。禁止在 实验室吃东西、吸烟。 ■认真做好各项实验，各种实验物品按指定地点存 放，使用后的吸管、滴管及玻片等放指定地方。 ■实验中发生意外事故时，应立即报告及时处理, 切勿隐瞒或自作主张，不按规定处理。 实验室规则 ■爱护室内仪器设备，按使用规则操作，不得随意 ■爱护室内仪器设备，按使用规则操作，不得随意 拨动电器开关，显微镜用好后要功能部件复位。 实验室公用物品用完之后按原样放回，不得擅自 借出或带出到其它实验室。 ■节约使用实验材料，如不慎损坏了器材，应告知 相关管理人员登记。 门、实验完毕后整理操作区，关好水、 需培养的材料要标记组名，姓名等。 门、 实验报告书写要求 *年级、班级、 等填写清楚。 ■实验名称 ■原理 实验者、同实验者、年月日■方法 实验者、同实验者、年月日 ■方法 ■结果 -分析讨论 对流免疫电泳 ，原理-对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳技术的结合。 ，原理 -对流免疫电泳是双向琼脂扩散与电泳技术的结合。 Ag或Ab分子在一定的pH溶液中带有电荷，在电场 作用下可发生定向移动。将Ag、Ab分别加在pH为 8.6缓冲液琼脂中电泳，因各种血清蛋白质都带负 泳向阳极。由于电渗作用,:体则流向阴极, 泳向阳极。 由于电渗作用, :体则流向阴极, 二者方向相反。 泳中的两种移动: 电泳力使Ab、Ag移向阳极。 ■电渗力使Ab、Ag移向阴极。 电泳力 电渗力 电渗力 . Ab带负电荷少，分子量大，所以电泳力小于电渗 力，向阴极移动。 -而Ag所带负电荷多，分子量较小，故其电泳力大 于电渗力，向正极移动。 ■如Ag、Ab相遇，在比例适当时即形成白色沉淀 线。由于电场限制了AgAb分子的自由扩散，因 而提高了试验的敏感性（提高10~20倍），并缩短 了反应时间（与双向琼脂扩散相比）。同双扩， 可定性确定抗原含量。 电场力 电渗力 Move to Ag Ab放阳极，Ag放阴极 」［材料 .抗原 .抗原(Ag)：人血清. lit -抗体(Ab):抗人血清 .巴比妥缓冲液(0.05 mol/L,Ph 8.6), ■其他：电泳仪、琼脂板打孔器、载玻片、 毛细吸管、电表 毛细吸管、 电表 方法I板：取4 ml煮沸的1. 5%巴比妥琼脂，立即浇注在 玻片上，制成厚薄均匀的琼脂板 方法 ■打孔：待琼脂凝固后，用打孔器按下图打孔，孔径3 mm,孔距5 mm。 ■加样：用微量加样器取Ag （人血清）20此分别加 于阴极侧1、2、3、4孔内。 .阳极侧5、6、7、8各孔均加抗体（抗人血清）。加 样量以孔满为宜，但不可溢出孔外。 100 V 50 min J—— ■电泳：琼脂板放入电泳槽内，琼脂板两端用滤纸 或纱布与缓冲液相接，Ag端接负极电源，Ab端接 正极电源。按电场强度4~6 V/ctn电泳50 min左右。 ■ U=160V,I=43mA 电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板，在黑色背景下观E3C7 电泳完毕，关闭电源，取出琼脂板，在黑色背景下观 E3 C7 察，凡AgAb孔间出现白色沉淀线者为阳性，孔间无 白色沉淀线者为阴性。如沉淀线不清晰可将琼脂板置 37C温箱数小时后再进行观察，也可染色观察。 ■在Ag与Ab孔间出现沉淀线者为阳性。沉淀线形状、 位置等差异，与Ag、Ab浓度及分子量有关。 对流免疫电泳中, tn Ag端为何接负极? 小鼠巨噬细胞吞噬功能的检测 .巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞 .巨噬细胞具有吞噬异物的功能，将巨噬细胞与被吞 噬物（鸡红细胞、白色念珠菌、白色葡萄球菌等）共 同温育，染色，在油镜下计数吞噬异物的巨噬细胞 的吞噬百分率和吞噬指数，以此判断巨噬细胞的吞 噬功能，从而评价机体的免疫状态。 ■本实验拟检测小鼠腹腔巨噬细胞对白色念珠菌的吞 噬功能。 ■小白鼠(murine peritoneal macrophages) ■白色念珠菌液（美兰染液着色） ■ 1 %可溶性淀粉溶液 ■美兰染液 ■解剖小鼠器械一套、显微镜、离心机、温箱等 ■试管、吸管、微量加样器、计数板 小鼠巨噬细胞制备:r实验前三天每只小鼠腹腔注射1 %可溶性淀粉1ml （已 做）。实验时眼球放血、断椎处死小鼠，新洁尔灭浸泡 5分钟。 小鼠巨噬细胞制备: III■剪开腹部皮肤，暴露腹膜，用镶子夹起腹膜芽开一小口 （注意避开血管），用164。灌注腹腔，收集腹腔液于试 管中（约4 ml）, 1500 r/min,离心10 min,去上清， 沉积细胞用1640离洗一次。最后沉积细胞用0.5ml含 10%小牛血清1640配成适当浓度备用（1-2 x 1。6/ml） III 白色念珠菌制备(have done)on 白色念珠菌制备(have done) on