细胞融合技术与单克隆抗体课件.pptx

高中生物学 人教版 选择性必修3 第2章细胞工程第2节 动物细胞工程（第2课时 动物细胞融合技术与单克隆抗体）淮南第二中学 朱叶 讨论传统抗体的制备过程和缺陷以PD-1抗体制备为例，结合特异性免疫的内容，回忆抗体制备的方法B细胞的作用有什么特点？人体内B细胞的种类和抗体的种类有着怎样的关系？传统方法制备的抗体有何缺陷？向动物反复注射PD-1抗原使动物产生抗体从动物血清中分离所需抗体 解决传统抗体制备缺陷的新思路抗体纯化难以实现分离B细胞被激活的B细胞是高度分化的细胞哪种细胞在体外培养时可以无限增殖？怎样获得既能分泌抗体，又能在体外培养的无限增殖细胞？ 活动1 尝试设计单克隆抗体的生产方案注射PD-1骨髓瘤细胞PD-1抗体B细胞怎么做？可行性？原理？技术难题？ 问题1：植物细胞的促融方法有哪些？解决技术难题物理方法：电融合法、离心法化学方法：聚乙二醇（PEG）法生物方法：灭活病毒诱导法 问题2： 两次筛选的先后顺序应该是怎样的？解决技术难题--分析两次筛选的先后顺序 问题2-1：如何从各种融合细胞中筛选杂交瘤细胞？解决技术难题诱导融合后，培养液中存在哪几种细胞？B细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞B细胞-B细胞多种骨髓瘤细胞 解决技术难题--活动2 设计筛选杂交瘤细胞的方法资料分析 DNA合成有2条途径：D通路和S通路。B细胞有两条通路但不能连续分裂，骨髓瘤细胞只有D通路。而氨基喋呤能阻断D通路。根据以上信息，设计一种方法，从培养液中筛选出杂交瘤细胞。B细胞合成DNA骨髓瘤细胞合成DNAS途径D途径D途径氨基喋呤氨基喋呤 问题2-2：如何筛选出能够产生单一PD-1抗体的杂交瘤细胞？解决技术难题有限稀释法：将杂交瘤细胞稀释至每毫升含有7~8个细胞倒置显微镜观察，确保每个孔最多只有1个细胞按每孔0.1ml注入培养板 问题2-2：如何筛选出能够产生单一PD-1抗体的杂交瘤细胞？解决技术难题何为抗体检测阳性？检测各孔上清液中的抗体是否能与特定抗原结合 解决技术难题-ELISA酶联免疫吸附实验 问题3：如何获得大量PD-1的单克隆抗体？解决技术难题培养杂交瘤细胞的方法有两种。可以注射到小鼠腹腔中增殖，也可以在体外条件下大规模培养，对于工业生产来说哪种方法更好一些？ 2014 年 PD-1 阻断药物 Opdivo（欧狄沃） 和Keytruda（可瑞达）。它们作为具有划时代意义的单抗药，备受世界瞩目。2021年PD-1单抗实现全球销售额 247.03 亿美元.PD-1单抗药物的生产 国产单抗K药初上市14万+1万+60万+降幅高达98%我国PD-1单抗药物的优势我国单抗药行业发展迅猛，科研工作者经过艰苦的攻关，打破了西方国家的垄断。再加之国家政策的大力扶持，单抗药产能增大，价格降低。目前国产单抗药年治疗费用已经降到年人均花费1W左右，惠及了众多的癌症患者。 活动3 交流单克隆抗体在临床中的应用—诊断试剂TC 活动3 交流单克隆抗体在临床中的应用—诊断试剂C表示质控线T表示检测线 活动3 交流单克隆抗体在临床中的应用--疾病治疗 活动4 设计新冠病毒单克隆抗体药物的生产方案设计新冠病毒单克隆抗体药物的生产方案 自评量规 小结一句话总结单克隆抗体，单克隆抗体有哪些优点？ 作业