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蛋白质的理化性质 分离纯化技术 黄炜 一、蛋白质的理化性质 （一）蛋白质两性电离 蛋白质具有两性电离特性，以pH 中性环境为例： • 多肽链两端氨基、羧基可解离 •酸性和碱性氨基酸残基侧链上的羧 基、氨基、胍基、咪唑基均可解离 NH + NH + NH 3 3 2 + - ←H ↑ OH ↑→ P P P COOH COO- COO- 阳离子 兼性离子 阴离子 pHpI pH=pI pHpI 蛋白质的等电点( pI ) ：当溶液处于某 一pH 时，蛋白质解离成正、负电 荷的数量相等，净电荷为零，此时溶 液的pH 称为该蛋白质的等电点。 •不同的蛋白质pI 不同 •体内多数蛋白质的pI 在pH 5 附 近，在pH 7.4 的体液中，多数蛋 白质以阴离子状态存在。 • 实际应用：电泳、离子交换层析 （二）蛋白质的胶体性质与沉淀 •蛋白质是高分子化合物，其颗粒在 胶体颗粒（1～100 nm)范围内，且 蛋白质颗粒表面有大量亲水基团， 故蛋白质属亲水胶体。 •蛋白质能稳定地溶于水中主要依靠 两个因素：水化膜与表面电荷。 水化膜： • 蛋白质的亲水基团多位于颗粒表面， 吸引水分子形成水化膜。 • 能 蛋白质相互 。 表面电荷： •在偏离蛋白质pI 的溶液中，蛋白质 表面带同种电荷。 • 同种电荷相互排斥， 蛋白质 蛋白质的沉淀：指蛋白质从溶液中 析出的现象。 • 若去除水化膜、减少表面电荷，蛋 白质极易发生沉淀 （如盐析、有机 溶剂沉淀法） （三）蛋白质的变性 蛋白质变性 （denaturation)：在某些 理化因素作用下，蛋白质特定的空 间构象被破坏，导致理化性质改变 及生物学活性丧失。 变性因素：加热、紫外线、强酸、强碱、 重金属、 、生物碱等 变性特点： • 空间结构破坏，一级结构完整 • 生物学活性丧失 • 易被蛋白酶水解 （肽链松散） • 易沉淀（疏水基团 、肽链相互缠绕 ） • 多数蛋白质变性后不能复性 蛋白质复性：去除变性因素后，少数 变性蛋 白质可恢复其原有的空间 结构和功能的现象。 尿素、 去除尿素和 -巯基乙醇 -巯基乙醇 天然状态 变性状态 复性状态 有活性 无活性 有活