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动物细胞制药第1页/共54页 第 五 章动物细胞制药第2页/共54页 第一节 概 述1、动物细胞培养的定义动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。第3页/共54页 2、动物细胞培养的历史（1）开始----1907，Harrison用蝌蚪的髓管放于一滴淋巴液内，培养出神经元。（2）成熟----以人的肿瘤细胞与组织为材料建立的各种细胞系，如Hela细胞系。第4页/共54页 3、动物细胞培养的优点（1） 细胞经培养后形成的细胞系和细胞株，特征均一。 （2） 理化环境可控制，培养物可直接被观测。 （3） 提供大量均一的细胞供制备用。 （4） 便于进行人工筛选。 （5） 结合显微影相技术，可观察细胞代谢活动和反应。目前，动物细胞培养技术已经广泛应用于病毒学，免疫学，遗传学，肿瘤学，分化及发育，细胞毒理试验，生物技术等各个领域。第5页/共54页 4、动物细胞培养的类别1、动物组织培养2、动物细胞培养（1）细胞团块单层培养（2）单细胞克隆株培养3、原代细胞培养（1）初代培养（2）细胞株确立培养4、细胞继代培养第6页/共54页 第二节 动物细胞的生理特点 一、动物细胞的形态 适应功能,形态各异。 离体培养细胞分两类： 贴壁细胞 悬浮细胞第7页/共54页 第8页/共54页 ⒈贴壁细胞 生长须有贴附的支持物表面， 自身分泌或培养基中提供的贴 附因子才能在该表面上生长。 两种形态： 成纤维细胞型 上皮细胞型第9页/共54页 动物细胞贴壁生长特性第10页/共54页 ⒉悬浮细胞 生长不依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长。如淋巴细胞。⒊兼性贴壁细胞 生长不严格依赖支持物。如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞。第11页/共54页 （2）超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。100级超净工作台指标：（≥0.5цm≤3.5粒/L）第12页/共54页 培养器具培养瓶培养板培养皿第13页/共54页 （4）倒置显微镜第14页/共54页 （5）纯化水装置第15页/共54页 二、动物细胞的生理特点⒈ 细胞的分裂周期长 细胞分裂时间为12～48h， 细胞的分裂 周期=间期+分裂期 间期（G1+S+G2） 分裂期（M）第16页/共54页 第17页/共54页 G1期：4～6h 合成DNA聚合酶 RNA合成S期：6～8h DNA合成G2期：2～5h DNA量加倍, RNA合成M期：0.5～1h 染色体分裂第18页/共54页 第19页/共54页 ⒉细胞生长需贴附于基质,并有接触抑制现象。⒊正常二倍体细胞的生长寿命是有限的。 ⑴原代培养 ⑵有限细胞系 ⑶无限细胞系第20页/共54页 ⒋动物细胞对周围环境要求十分严格，对理化因素很敏感：如：渗透压、pH、离子浓度、剪切 力、微量元素等。第21页/共54页 ⒌动物细胞对培养基要求高： 必需氨基酸、维生素、无机盐、 微量元素、葡萄糖、细胞生 长因子、贴壁因子等。第22页/共54页 　⒍动物细胞蛋白质的合成途径和修饰功能与细菌不同。 动物细胞蛋白质的合成部位： ⑴游离核糖体 ⑵粗面内质网的核糖体 第23页/共54页 游离核糖体合成蛋白质用于细胞质基质内。 粗面内质网的核糖体合成蛋白质是分泌的，并在膜中整合修饰为蛋白多糖、糖蛋白等，由粗面内质网提供膜形成大囊泡分泌出胞外。第24页/共54页 动物细胞生产药物缺点:培养条件高、成本贵、产量低。优点:分泌胞外、纯化方便、翻译 后修饰糖基化，与天然产品一致。第25页/共54页 第三节 生产用动物细胞的要求和获得 一、生产用动物细胞的要求 ⒈原代细胞 ⒉二倍体细胞系 ⒊转化细胞系第26页/共54页 二、生产用动物细胞的获得⒈原代细胞是直接取自动物组织器官,经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。需要大量动物，费钱费劳力。鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、淋巴细胞。第27页/共54页 ⒈原代细胞培养定义：从新鲜供体取得组织细胞后在体外进行首次培养，一般持续1－4周。步骤：取材---组织分离---培养第28页/共54页 ⒉二倍体细胞系　原代细胞经过传代筛选克隆， 从多种细胞成分的组织中，挑 选并纯化出某种具有一定特征 的细胞株。第29页/共54页 二倍体细胞的培养意义二倍体细胞：（1）具有二倍性染色体（2n），染色体核型正常。（2）培养条件下只具有有限的生命力，不能进行无限期的分裂繁殖。（