DB15T 2956—2023马铃薯干腐病菌PCR检测方法.pdfVIP

ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2956—2023 马铃薯干腐病菌PCR 检测方法 Detection of pathogenic fungus for potato dry rot by PCR method 2023-04-26 发布 2023-05-26 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原理 1 5 试剂与仪器 1 试剂 1 溶液配制 1 仪器 2 6 操作步骤 2 对照的设立 2 取样 2 马铃薯组织样品DNA 提取 2 PCR 扩增 2 7 琼脂糖凝胶电泳 3 8 结果 3 试验成立的条件 3 结果判定 3 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区马铃薯标准化技术委员会（SAM/TC 40）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古中加农业生物科技有限公司、乌兰察 布市检验检测中心、内蒙古朱日和镇综合保障和技术推广中心。 本文件主要起草人：刘晓权、赵莉、张键、吕文霞、高俊、齐桂敏、任玮、赵欣、孙翠翠、孙辉远、 姜涛、王斌、常青、李燕、田艳花、包美丽、刘广晶、连普琛、俎爱忠、毕晓宇、董林峰、李建青、姬 媛琦、陈曦、胡越然、王勐。 马铃薯干腐病菌PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了马铃薯干腐病菌PCR检测方法。 本文件适用于马铃薯块茎中干腐病菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 马铃薯干腐病 potato dry rot 由镰刀菌属（Fusarium spp.）真菌引起的病害。该病在马铃薯生长期和贮藏期均可发生，主要危 害块茎，病斑多发生于薯块脐部。发病初期薯块表面出现黑褐色凹陷病斑，随后扩大形成轮纹状褶皱； 后期薯块内部变空，整个薯块变硬、变轻、干缩，呈灰褐色或深褐色，干燥时薯块内部长满白色菌丝； 湿度大时发病处变红呈糊状。 4 原理 本文件采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）方法检测马铃薯干腐病菌。其原 理是：以马铃薯干腐病菌保守序列设计特异性引物，以基因组 DNA 为模板，在Taq DNA聚合酶的作用下 进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的片段，从而达到鉴定马铃薯干腐病菌的目的。 5 试剂与仪器 试剂 5.1.1 以下所有试剂，除另有规定外，均使用分析纯试剂；水为符合GB/T 6682 中规定的一级水。 5.1.2 植物基因组提取试剂盒、2×Taq PCR Master Mix、无水乙醇、50×TAE 电泳缓冲液、溴化乙锭、 DNA Marker、6×DNA Loading Buffer 等均从试剂公司购买。 溶液配制 5.2.1 1×TAE 电泳缓冲液 量取50×TAE电泳缓冲液20 mL，加水定容至1 L。 5.2.2 1.5%琼脂糖凝胶 称取1.5 g琼脂糖，加入100 mL的1×TAE电泳缓冲液，微波炉加热至琼脂糖融化，待溶液冷却至50