DB15T 2958—2023马铃薯黑痣病菌PCR检测方法.pdfVIP

ICS 65.020.01 CCS B 16 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2958—2023 马铃薯黑痣病菌PCR 检测方法 Detection of pathogenic fungus for potato black scurf by PCR method 2023-04-26 发布 2023-05-26 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 原理 1 5 试剂与仪器 1 试剂 1 溶液配制 2 仪器 2 6 操作步骤 2 对照的设立 2 样品制备 2 马铃薯组织样品DNA 提取 2 PCR 扩增 2 7 琼脂糖凝胶电泳 3 8 结果 3 试验成立的条件 3 结果判定 3 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020 《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙古自治区马铃薯标准化技术委员会（SAM/TC 40）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区产品质量检验研究院、内蒙古中加农业生物科技有限公司、乌兰察 布市检验检测中心、内蒙古朱日和镇综合保障和技术推广中心。 本文件主要起草人：刘广晶、刘晓权、张之为、高晓娟、包美丽、赵莉、高俊、吕文霞、孙翠翠、 王斌、齐桂敏、任玮、孙辉远、侯晓云、赵欣、姜涛、常青、李建青、王勐、徐晓、张利萍、李艺凡、 姚婷、梁敏。 马铃薯黑痣病菌PCR 检测方法 1 范围 本文件规定了马铃薯黑痣病菌PCR检测方法。 本文件适用于马铃薯植株茎秆、块茎等组织中黑痣病菌的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 马铃薯黑痣病 potato black scurf disease 由丝核菌属立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kühn）引起，可通过病薯上或留在土壤中的菌核越 冬，带病种薯是远距离传播的主要载体。马铃薯生长期间病菌从土壤中根系或茎基部伤口侵入，引起发 病。主要危害马铃薯幼芽、茎基部及块茎，会造成马铃薯缺苗断垄，发病严重时将导致植株死亡。该病 菌既可侵染马铃薯植株地上茎基部又可侵染地下块茎。在地上茎基部可形成白色霉层，而在地下块茎上 则可形成大小数量不等的黑色菌核，严重影响马铃薯块茎品质和商品价值。 4 原理 本文件采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）方法检测马铃薯黑痣病菌。其原 理是：以马铃薯黑痣病菌ITS序列区设计特异性引物，以基因组 DNA 为模板，在Taq DNA聚合酶的作用 下进行PCR扩增，根据PCR扩增结果判断该样品中是否含有目的片段，从而达到鉴定马铃薯黑痣病菌的目 的。 5 试剂与仪器 试剂 5.1.1 以下所有试剂，除另有规定外，均使用分析纯试剂；水为符合GB/T 6682 中规定的一级水。 5.1.2 植物基因组提取试剂盒、50×TAE 电泳缓冲液、2×Taq PCR Master Mix、无水乙醇、溴化乙锭、 DNA Marker、6×DNA Loading Buffer 等均从试剂公司购买。 溶液配制 5.2.1 溴化乙锭溶液（10 mg/mL） 称取溴化乙锭10