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植物器官培养第1页/共145页第2页/共145页第一节 概述植物器官培养（Organ Culture）是指对植物某一器官的全部、部分或器官原基进行离体培养的技术。分为营养器官（根、茎、叶）和繁殖器官（胚胎、种子、花器官）培养。第3页/共145页根培养茎培养（ 包括茎尖、茎段）叶培养（包括叶原基、叶柄、 叶鞘、叶片、子叶）营养器官培养植 物 器 官 培 养花培养 （包括花托、花瓣、花丝、 花柄、子房、花药）种子培养（包括成熟与未成熟）胚胎培养（包括幼胚、成熟胚、 胚珠、 子房、胚乳培养 ）繁殖器官培养第4页/共145页第5页/共145页 外植体形态发生形成完整植株的途径（一）外植体-愈伤组织-完整植株。 具体又可分为三种： 1、愈伤组织-同时长芽和根-植株。2、愈伤组织-茎-根-植株。3、愈伤组织-根-芽-植株。4、愈伤组织-体细胞胚-植株第6页/共145页第二节 营养器官培养一、离体根的培养二、茎尖的培养*三、茎段的培养四、离体叶的培养*第7页/共145页一、离体根的培养 （一） 意义： ①生理代谢研究的优良实验体系 ②研究器官分化形态建成的良好体系 ③建立快速生长的根无性系 ④进行诱变育种第8页/共145页（二） 培养方法1. 培养基选择 White培养基；2/3或1/2 MS 和 B5培养基 注：离体根生长要求提供全部必需元素，蔗糖、硝态氮效果好，加入VB1、VB6最重要，生长素对离体根影响不一致。培养温度25－27℃，暗光培养。第9页/共145页 离体根生长的营养要求1、无机成分 要求培养基中有全部必要元素，因为它是离体生长所需要的，一般的为MS、B5培养基。2、氮源 氮源有铵态氮、硝态氮和可溶性有机氮如氨基酸或酰胺等，其中以硝态氮的效果最好。加入含各种氨基酸的水解酪蛋白，能促进离体根的生长。第10页/共145页3、碳源 以蔗糖的效果最佳，几乎为葡萄糖的10倍。蔗糖的浓度为2—3%。4、维生素 维生素以B1和B6最为重要，缺少它根的生长受到阻碍，而加入它可使根的生长成倍的加快。B1的使用浓度为0.1-1.0mg/L为宜。5、生长物质 对离体根的生长而言，生长素的效应最为明显，在一般情况，加入适量的生长素能促进根的生长，其反应和需要量因植物种而异：6、温度和光照 黑暗有利于根的形成，温度一般在16-25℃7、PH 根发生和生长所需的PH范围一般为5.0-6.0第11页/共145页2. 无性繁殖系的建立 种子消毒 →→ 接种→→待根伸长后从根尖一端切取长1.2cm的根尖→→接种于培养基→→发育出侧根→→待侧根生长约1周后切取侧根的根尖进行扩大培养→→又迅速生长并长出侧根→→切下进行培养，如此反复→→得到从单个根尖衍生而来的离体根的无性系。 3. 培养条件 暗光和温度25-27℃。第12页/共145页一、离体根的培养 4、根的间接增殖第一步在脱分化培养基上诱导形成愈伤组织，如胡杨的根段培养，可诱导形成白色愈伤组织。第二步在再分化培养基上诱导形成芽的分化，如胡杨从绿色愈伤组织分化出小植株。第13页/共145页胡萝卜根培养第14页/共145页5、培养方式 离体根的培养方式有三种类型。 第一种固体培养法，即将根尖接种在固体培养基上，根依靠培养基中的养分和生长物质而不断生长。 第二种是液体培养法，把根尖接种在无琼脂的液体培养基中，经常振荡使根获得充足的氧气。 第三种是固体-液体培养法，就是把根基部插入固体琼脂培养基中，根尖浸在液体培养基中，根尖生长而根不断的伸长和分枝。 第15页/共145页二、茎尖的培养*（一）茎尖培养概念及类型（二）病毒在植物体内的分布（三）茎尖培养方法及步骤第16页/共145页 (一)茎尖培养概念及类型 茎尖培养：切取茎的先端部分或茎尖分生组织部分，进行无菌培养。 茎尖培养根据培养目的和取材大小可分为： ①微茎尖培养: 带有1-2个叶原基的生长点, 其长度不超过 0.5mm。 第17页/共145页 ②普通茎尖培养：较大的茎尖(如几mm到几十mm)、芽尖及侧芽。 这里主要讲普通茎尖培养。这种培养技术简单，操作方便，茎尖容易成活，成苗所需时间短 。 茎尖培养的意义： 普通茎尖培养技术简单，操作方便，易成活，成苗 时间短，加快繁殖。 微茎尖培养可获得脱毒苗；第18页/共145页第19页/共145页(二)病毒在植物体内的分布病毒侵染植株的叶片后，经过一段时间，即向附近的细胞增殖转移。转移速度很慢，每小时只有几微米。当叶片内病毒浓度增大到一定量时，就转移到韧皮部，随后通过维管束转移到其它部分。由于病毒转移速度慢，加上茎尖分生组织无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞分裂和生长的速度，所以生长点的病毒数量极少，几乎检测不出。茎尖培养时，切取的茎尖越小，带病毒的可能性就越小。—