生物化学ppt第三章第二节.pptVIP

原理：一般的多肽链太长，含有几百甚至几千个氨基酸残基。故先将它切割成若干个小肽段，然后再分别测定小肽段的氨基酸顺序。 多肽链的降解必须满足两个条件：选择性强，反应产率高； 主要方法：酶解法和化学法； ? 酶解法:某些蛋白质水解酶能够选择性地水解多肽链中某一肽键，因而能预测出可能得到的小肽段数目，以及端基氨基酸的类型。 常用的酶：胰蛋白酶，糜蛋白酶，胃蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，羧肽酶和氨肽酶 多肽链的选择性降解 3. 多肽链氨基酸顺序分析 第六十页，共一百二十二页，2022年，8月28日 ? 化学法：溴化氰水解法(Cyanogen bromide) ： 它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 特点：专一性强，产率高。 多肽链的选择性降解 第六十一页，共一百二十二页，2022年，8月28日 多肽链端基氨基酸分为两类：N-端氨基酸(amino-terminal)和C-端氨基酸。 在肽链氨基酸顺序分析中，最重要的是N-端氨基酸分析法。 末端基氨基酸测定 第六十二页，共一百二十二页，2022年，8月28日 Sanger法。2,4-二硝基氟苯在碱性条件下，能够与肽链N-端的游离氨基作用，生成二硝基苯衍生物（DNP）。 在酸性条件下水解，得到黄色DNP-氨基酸。该产物能够用乙醚抽提分离。不同的DNP-氨基酸可以用色谱法进行鉴定。 末端基氨基酸测定 ? 二硝基氟苯（DNFB）法