[免疫组织]第一章 组织学研究方法在生物医学20181015.pptxVIP

免疫组织化学与组织学相关技术 ;在经典的切片染色方法的基础上，结合当今生物医学发展建立起来的技术方法。 石蜡切片+HE染色 免疫组化 原位杂交 电镜术 组织工程…...;Med Sci Monit.?（2015） Abnormal Expression of Urea Transporter Protein in a Rat Model of Hepatorenal Syndrome Induced by Succinylated Gelatin.;Figure 1. Immunohistochemical staining of embryonic stem cells (ESCs) proteins SOX2, Nanog and Nestin in non-cancerous nasopharyngeal tissues and nasopharyngeal carcinoma (NPC);Hela in love ;Abnormal mouse embryo ;第1章  组织学常用技术在生物医学研究中的应用 ;组织学常用技术;一、一般光学显微镜技术 ; 血涂片（瑞氏染色）;皮下组织铺片; 骨磨片; （二）石蜡切片标本的制备 ;;取材原则;几种常用的固定液 10％（中性）福尔马林固定液（多用于固定组织） bouin固定液（多用于固定组织） 苦味酸饱和水溶液 75ml 37％～40％福尔马林溶液 25ml 冰醋酸 5ml 丙酮（多用于固定细胞） 4%多聚甲醛（固定细胞/组织） 固定时间：一般24小时内;（梯度酒精脱水-二甲苯透明-浸蜡）-包埋：;自动包埋机;切片机 3～10μm ;;（三）火棉胶切片;（四）冰冻切片(frozen section);（五）苏木精-伊红染色 (H-E染色);H-E染色常见用途;病理诊断报告;H-E;其它染色方法（特殊染色法）;Masson三色染色法（显示胶原）; 银染法（显示神经元）;二、几种特殊显微镜的应用;倒置相差显微镜图片;（二）荧光显微镜(fluorescence microscope);荧光显微镜的应用： 1）观察组织细胞的自发性荧光 2）荧光染色后观察 荧光染料： 如：DAPI， Hoechst33342用于染细胞核（DNA） 罗丹明 GFP（绿色荧光蛋白） ;Hoechst33342核染色;3）免疫荧光染色法;免疫荧光细胞化学（卫星细胞）;PLoS Pathog.?2017 Sep 19;13(9):e1006609: 三标法（自噬蛋白）;（三）共聚焦激光扫描显微镜(confocal  laser scanning microscope, CLSM);CLSM应用： 可重建细胞的三维图像，可对细胞进行定量分析研究；故CLSM又有细胞CT之称。 ;体外培养大鼠附睾管上皮细胞Actin 免疫荧光染色, CLSM图象;三、 电子显微镜技术;; 电子密度高（electron dense） 电子密度低 (electron lucent);TEM显示细胞内部亚细胞结构;透射电镜样品的制备 要求极严格 1. 取材: 迅速，组织块要小（1mm3以内） 2. 固定：常用戊二醛和锇酸进行双重固定。 3. 树脂包埋 4. 超薄切片：由于电子穿透力低，必须制备超薄切片（切片厚 约80nm） 5. 电子染色：即在样品制作过程中用铅、铀等重金属盐进行电子染色。 ;(二) 扫描电子显微镜（SEM）;扫描电镜： 特点： 图像富有立体感。 用于细胞形态、运动功能等研究 ; ; PAS反应：过碘酸—希夫反应 (periodic acid Schiff reaction，PAS)： 检测组织或细胞中有无多糖存在。 基本原理：; PAS反应;2. 酶类显示法;G-6-P酶（葡萄糖-6-磷酸酶）;3. 脂类显示法;4. 核酸显示法;4. 核酸显示法; 五、免疫组织（细胞）化学技术;Immunohistochemistry staining of MTA2 protein in chronic nasopharyngitis(A) and NPC tissues(B-D). Oncotargets ther（2016）; ISH基本原理: 应用带有标记的（放射性或非放射性物质）DNA或RNA片段为核酸探针，与组织切片或细胞内待