无菌操作技术一.pptxVIP

无菌操作技术一第1页/共18页第2页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。第3页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制 （1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。生化去垢剂（detergent） 　A．中性去垢剂 又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如/view/202748.htm山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20第4页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制B．阴离子去垢剂 ： 常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。常用于核酸的提取。 C．阳离子去垢剂 ：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。 第5页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制D．天然表面活性剂 ：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。 E．两性表面活性剂： 在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。 第6页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。其配制方法如下： ①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。 ②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。 第7页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。 （4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。 （5）1mol/LKOH溶液。 （6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。 （7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。 （8）5%-10%磷酸三钠（Na3PO4·12H2O）溶液（用于洗涤油污物）。 （9）氢氧化钾（KOH）的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠（NaOH）溶液，适用于清除容器内壁污垢，但这两种强碱性洗涤液对玻璃仪器的侵蚀性很强，故洗涤时间不宜过长，使用时应小心慎重。 （10）有机溶剂：丙酮、乙醇、乙醚等可用于洗脱油脂、脂溶性染料等污痕。二甲苯可洗脱油漆类污垢。 第8页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制2．玻璃仪器的清洗 （1）初用玻璃仪器的洗涤 新购置的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用去垢剂（0.5%水溶液）或肥皂水洗刷，再用自来水洗净。然后浸泡1%—2%HCl溶液中过液，次日取出用自来水充分冲洗，最后再用蒸馏水漂洗数次，置烘箱内烘干或倒置晾干备用。 （2）使用过的玻璃仪器的洗涤 第9页/共18页①一般玻璃仪器洗涤 自来水冲洗→去垢剂洗涤或浸泡于0.5%去垢剂水溶液中→将器皿内外（特别是内壁）仔细刷洗后 →自来水充分洗净→蒸馏水漂洗数次，烘干或晾干备用。凡洗净的玻璃器皿，其壁上不沾有水珠，否则表示尚未洗净，应按上述方法重新洗涤。量具玻璃仪器不能烘烤，只能晾干或风干第10页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制②移液管（吸量管）的洗涤 移液管每次使用后须及时用流水冲洗或浸泡于冷水中，特别是吸取粘滞性较大的液体（全血、血浆、血清等）后应立即用流水充分冲洗，以免物质干涸和堵塞移液管。通常使用过的移液管经自来水冲洗后，可浸泡于0.5%去垢剂溶液中或铬酸洗液中过夜（不少于4h），然后分别用自来水充分冲洗和蒸馏水漂洗，晾干备用。 第11页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制③玻璃比色皿和石英比色皿的清洗 比色皿使用后应立即用蒸馏水充分冲洗，倒置在清洁处晾干备用。所有比色皿均可用0.5%去垢剂溶液洗涤，必须用脱脂棉小心地清洗，然后用大量蒸馏水充分漂洗干净，倒置晾干。但不能用氢氧化钾的乙醇溶液及其他强碱洗涤液清洗比色皿，因这样导致比色皿的严重腐蚀。 第12页/共18页无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制3．塑料器