HRM高分辨率熔解曲线分析技术百替生物.pptxVIP

HRM高分辨率熔解曲线分析技术百替生物;RealTime PCR;HRM与RealTime PCR的异同点：;饱和染料有效避免了检测荧光信号中的假阳性 新的饱和染料降低了传统染料对PCR反应的抑制作用 LC GREEN;高分辨率： DNA的熔解曲线取决于DNA碱基序列。理论上任何一个碱基的改变，都会造成TM值的差异，但是单个碱基改变造成的差异是极小的，通常只有零点几度。因此要精确检测TM值的差异，就至少需要保证每0.1℃获取一次荧光信号。 LightScanner;HRM原理示意图;HRM的技术优势： 1.整体操作方法简单，检测灵敏度高，可检测出单个碱基的改 变，检测效率高，5-10分钟即可完成对96/384孔板的检测。 2.从PCR到检测荧光信号，整个过程在同一个管中进行，最大 程度的避免了污染。 3.无需事先知道突变位点，无需设计探针，大大简化实验设计 时间和研究成本。;HRM在医学领域中应用： 1)疾病相关基因（癌基因）特定区段突变位点的扫描，新突 变的发现2) HRM在序列配对中的应用。 3) HRM在基因分型中的应用。 4) HRM在甲基化分析中的应用。 ;在胃肠道间质瘤（GIST）中新发现的7个c-kit激活型(c-kit-activating)突变基因位于第11号外显子中，为从基因水平诊断GIST提供了新的方法。(Willmore et al., 2004) Anatomic Pathology 在非小细胞性肺癌（NSCLC）患者中发现第19号外显子中存在有(L747-P753insS)突变，为以后针对性的分子诊断以及设计药物有潜在意义。(Smith et al., 2008) Clinical Pathology ;HRM在序列配对中的应用举例;HRM在基因分型中的应用举例;HRM在甲基化中的应用; 由于HRM的操作与后期数据分析简单、易懂,在多个医学研究领域收到了广泛关注并发展起来,高分辨率熔解曲线已经成为医学上DNA诊断的最为理想的解决方法。 ;Thank you!;感谢观看！