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细胞培养实验指导大全第1页/共38页 CO2培养箱WenzhouMedical College 全世界的用户对二氧化碳培养箱都有两条最基本的要求，一是要求二氧化碳培养箱能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供最精确稳定的控制，以便于其研究工作的进展；二是要求二氧化碳培养箱能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范。 第2页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College一、二氧化碳进气压力：0.08~0.1 MPa ( 0.8-1 bar ) 压力表选用：初级压力25MPa，次级压力0.2MPa 。松→紧 压力 低→高。进气正常的现象。压力过高的危害，注意安全。压力调节稳定需要时间，原因：残余气体，压力表不稳。。二、温度控制 培养箱的最低工作温度一般是高于室温5°C ，空气循环提高温度均一性。温度恢复时间（37℃），开门时间过长，超温；水盘的水温影响。门加热系统，即使箱内相对湿度高达98%，所有内壁表面亦能保持完全干燥 。 ▼第3页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College 第4页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College 第5页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College ▲幻灯片 3第6页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College三、二氧化碳浓度控制 按培养基中的NaHCO3设定二氧化碳浓度：NaHCO3 1.97g/L ，CO2浓度5% ； NaHCO3 3.95g/L， CO2 10% 。RPMI1640培养基每升2.1g碳酸氢钠；DMEM每升3.7克碳酸氢钠；F12 NaHCO3 1.18g/L ;DMEM/F12 NaHCO3 2.56 g/L 。 HEPES 缓冲液可与低水平的碳酸钠（0.34g/L）共用，以抵消因额外加入HEPES 引起的渗透压增加。在这种培养条件下，细胞培养瓶的盖子应拧紧，以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中。 注意第7页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College四、相对湿度 水盘蒸发面积大，增强蒸发作用，使培养箱内能快速达到饱和湿度状态。无菌蒸馏水，定期检查、定期更换。 二氧化碳培养箱停止使用时，除水，否则发霉。 第8页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College五、防污染和消毒灭菌 空气过滤：HEPA过滤器能过滤培养箱内空气，可过滤除去99.97%的0.3微米以上的颗粒，箱体关闭后5分钟内达到空气100级。乙醇消毒。 紫外消毒：紫外消毒能力是与紫外灯距离目标的距离的二次方成反比，距离越远，消毒能力越差，且无穿透能力，难以达到彻底灭菌的要求； 高温湿热：目前比较有效消毒灭菌的方法，高温消毒又分为两类，一是传统的高温干热消毒，另一种是先进的高温湿热灭菌。 第9页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College六、重要提示 需要定时更换的部件：HEPA过滤器、空气过滤器 需要定时处理的工作：消毒、水盘 第10页/共38页 CO2培养箱使用注意事项 WenzhouMedical College ▲幻灯片 3第11页/共38页 细胞培养室Wenzhou Medical CollegeBiotechnology Research Platform第12页/共38页 细胞培养室WenzhouMedical College无菌级别：万级，局部100 级Nikon 倒置生物显微镜Nikon DS-5M-L1显微摄影系统Thermo二氧化碳培养箱Labsystems BioMate电动移液器第13页/共38页 细胞培养室使用注意事项 WenzhouMedical College 细胞培养室的大小依需要而定，一般由更衣间、缓冲间和操作间三部分组成。更衣间放在外，主要供更换衣帽、鞋子等。缓冲间位于更衣间与操作间之间，也可同时和几个操作间相通。操作间放在内间，主要供无菌操作和细胞培养，房间应不受日光直射，大小适当，高度适宜(2.5m)。房间过大，清扫和消毒不便；过小，操作不便；顶部过高会影响紫外线的有效灭菌效果。墙壁应光滑无死角，以便清洗和消毒。