生物分离技术综合实验.pptxVIP

生物分离技术综合实验第1页/共29页 实验一、 植物色素的制备五、操作1、不同浸提剂浓度对黄酮提取率的影响1.1取干粉原料15克，分成6组（2.5克每组），用8倍体积（指料液比v/m为8：1）即20ml的40%、70%，95%的乙醇浸提（温度70℃，时间1.5h），浸提时每隔15 min用手轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。1.2 精密吸取上清液1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加质量分数5％亚硝酸钠0.4 mL，放置6 min后，加质量分数10％硝酸铝0.4 mL，放置6 min，再加质量分数4.3％氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在510nm波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提剂浓度。（按三个水平，每个水平做两组操作，即每个单因素条件得六个数据。）第2页/共29页 实验一、 植物色素的制备2、不同浸提时间对黄酮提取率的影响2.1 取干粉原料15克，分成6组（2.5克每组），用按8：1（指料液比v/m）的70%乙醇浸提（温度70℃），浸提时间分别为90min、120min，150min，浸提时每隔15分钟用手轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。2.2 精密吸取上清液1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加质量分数5％亚硝酸钠0.4 mL，放置6 min后，加质量分数10％硝酸铝0.4 mL，放置6 min，再加质量分数4.3％氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在510nm波长下测得其吸光度值，得出最优的浸提时间。（按三个水平，每个水平做两组操作每个水平做两组操作，即每个单因素条件做六个数据。）第3页/共29页 实验一、 植物色素的制备3、不同料液比对黄酮提取率的影响3.1 取干粉原料15克，分成6组（2.5克每组），用按6：1，8：1，10：1（指料液比v/m，即ml/克）的70%乙醇浸提（温度70℃，时间1.5h），浸提时每隔15分钟用手轻摇2min。浸提所得粗液进行离心（4500r/min20min），得浸提上清液。3.2 精密吸取上清液1.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加质量分数5％亚硝酸钠0.4 mL，放置6 min后，加质量分数10％硝酸铝0.4 mL，放置6 min，再加质量分数4.3％氢氧化钠4 mL，加蒸馏水至刻度，摇匀，放置15 min，在510nm波长下测得其吸光度值，按V*A值的大小比较得出最优的料液比。选做部分：若出现从6：1→8：1→10：1的（V*A）持续平稳增加，则可以继续加大料液比（可以为12：1，14：1,……）,直到找到拐点位置的最佳料液比。 第4页/共29页 实验一、 植物色素的制备六、实验注意事项1、将本实验中所有的乙醇提取的浸提液集中起来（一定要记下这些浸提液所对应的原料质量M），量取其总体积V，将提取液分出50ml，将这50ml和其余色素液分置于两个烧杯中，然后将两个烧杯在4℃左右的低温下并用保鲜膜封闭保存（按现在的温度，放在台子上避光保存即可），以供后面纯化实验使用。2、在色素提取过程中，每隔一段时间要进行轻摇，摇晃时幅度要小，以免使提取原料粘在壁上，造成原料损失。3、在做不同料液比对色素提取影响实验时，比较结果优劣要用V*A,即：体积*吸光度值。第5页/共29页 实验一、 植物色素的制备六、实验注意事项4、离心前一定要认真平衡好，两管质量平衡误差应在0.1克以内。同时，在离心过程中，一定要有专人看护以免发生事故。5、实验当中的提取液一定要全部从磨口锥形瓶和离心管中倒出，在将离心好的色素倒出时，一定要小心，不要将底部的沉降物倒出来。6、色素提取过程中一定要在锥形瓶上加上塞子，若乙醇蒸发较快时（如：80%以上的高浓度乙醇提取时），可以考虑在磨口锥形瓶上加一蛇形管，但低浓度乙醇提取时没有必要加蛇形管。第6页/共29页 实验一、 植物色素的制备7、上样液的制备（该步骤亦可以在实验二中完成）将实验一中所得的所有浸提液用烧杯放在100℃水浴中浓缩到20ml，将所得浓缩液置于50ml（或更大的）分液漏斗中，按等量体积加入石油醚后塞上塞子并充分摇匀，弃石油醚层，得下层黄酮液，放在90℃水浴中浓缩，浓缩至10ml（具体操作时，可先用大烧杯进行浓缩，待溶液约50ml左右时，改用50ml小烧杯进行浓缩，这样便于进行定量），备用。第7页/共29页 实验一、 植物色素的制备8、测量吸光度时，一定要设空白对照（即把除1ml样液以外的其余9ml亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、蒸馏水+1ml乙醇）9、由于各提取液浓度较大，在测量吸光度前，一定要将待测液取出1mL，稀释到10mL后，再按前面A值测定方法进行测定。第8页/