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沙门氏菌检验第1页/共35页第2页/共35页沙门氏菌属的生物学特性培养特性：沙门氏菌需氧或兼性厌氧，10～42 ℃都可生长，最适生长温度为37℃，最适pH为6.8～7.8。营养琼脂平板上：35～37℃培养18~24h，其菌落大小一般为2～3mm，光滑、湿润、无色、半透明、边缘整齐。血平板上：中等大小的灰白色菌落。生化特性：绝大多数沙门氏菌有规律的发酵葡萄糖产酸产气，但也有不产气者，不发酵蔗糖和侧金盏花醇、不产生吲哚、不分解尿素。第3页/共35页沙门氏菌典型群落伤寒沙门氏菌 第4页/共35页食品安全国家标准食品微生物学检验 沙门氏菌检验National food safety standardFood microbiologial examination:Salmonella2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布第5页/共35页前 言本标准代替GB/T 4789.4-2008《食品卫生微生物检验沙门氏菌检验》。本标准与GB/T 4789.4-2008 相比，主要变化如下： ——修改了标准的中英文名称； ——修改了标准的范围； ——修改了培养基和试剂； ——修改了设备和材料；——修改了附录A。 本标准的附录A、附录B 为规范性附录。 本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB 4789.4-84、GB 4789.4-1994、GB/T 4789.4-2003、GB/T 4789.4-2008第6页/共35页范 围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella ）的检验方法。 本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。第7页/共35页设 备 和 材 料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他还有：★冰箱：2 ℃～5 ℃。★恒温培养箱★均质器★振荡器★电子天平：感量0.1g★无菌锥形瓶:容量500mL，250 mL★无菌试管★无菌培养皿★无菌吸管★无菌毛细管★ pH 计或pH 比 色管或精密pH 试纸★全自动微生物生 化鉴定系统 第8页/共35页缓冲蛋白胨水（BPW ）四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液亚硫酸铋（BS ）琼脂HE 琼脂木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD ）琼脂沙门氏菌属显色培养基三糖铁（TSI）琼脂蛋白胨水、靛基质试剂 氰化钾（KCN ） 培养 尿素琼脂赖氨酸脱羧酶试验培养基糖发酵管邻硝基酚 β-D 半乳糖苷（ONPG）培养基半固体琼脂丙二酸钠培养基沙门氏菌O 和H 诊断血清。 生化鉴定试剂盒培 养 基 和 试 剂 第9页/共35页操 作 步 骤1、前增菌——第一步使食物样品在含有营养的非选择性培养基中增菌，使受损伤的沙门氏菌细胞恢复到稳定的生理状态。2、选择性增菌——在含选择性抑制剂的促生长培养基中间，样品进一步增菌的一个步骤。此培养基允许沙门氏菌持续增殖，同时阻止大多数其他细菌的增殖。3、选择性平板分离——这一步采用固体选择性培养基，抑制非沙门氏菌的生长，提供肉眼可见的疑似沙门氏菌纯菌落的识别。4、生物化学筛选——排除大多数非沙门氏菌。也提供了沙门氏菌培养物菌属的初步鉴定。5、血清学技术——提供了培养物菌种的鉴定。第10页/共35页沙门氏菌检验程序检 样25g(ml)样品+225mlBPW36℃±1 ℃，8h-18h 36 ℃±1 ℃，18h~24h1ml+TTB10ml1ml+SC10ml 42 ℃±1 ℃，18h~24hBSXLD(或HE、显色培养基)36 ℃±1 ℃，40h~48h36 ℃±1 ℃，18h~24h挑取可疑菌落第11页/共35页TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素（pH7.2），KCN生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统+A1反应结果与左侧描述不符A2A3 甘露醇+、山梨醇+ ONPG- 沙门氏菌，血清学试验 非沙门氏菌 报 告第12页/共35页5、血清学鉴定 a）抗原的准备 一般采用 1.2％～1.5％琼脂培养物作为玻片凝集试验用的抗原。 O 血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的（如2 ％～3％） 培养基上再检查；如果是由于Vi 抗原的存在而阻止了O 凝集反应时，可挑取菌苔于 1 mL 生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H 抗原发育不良时，将菌株接种在0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中央，俟菌落蔓延生长时，在其边缘部分取菌检查；或将菌株通过装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2 次,自远端取菌培养后再